酪酪肽完全抗原的制备及酪酪肽被动免疫对大鼠营养生理效应的影响

摘要

本文以酪酪肽(PYY)和载体蛋白(牛血清蛋白，BSA)的偶联复合物作为抗原，主动免疫家兔，目的在于制备出含有PYY抗体的血清，用PYY抗血清被动免疫大鼠，研究通过免疫中和技术消耗内源性PYY，初步探讨PYY对大鼠生产性能、血清激素水平和组织消化酶的影响。
　　 试验一通过碳二亚胺(EDC)法将PYY和BSA偶联制备PYY完全抗原，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测是否偶联成功。
　　 选用健康的雄性家兔三只，其中两只为试验兔，用合成的PYY-BSA免疫家兔。初次免疫时用弗式完全佐剂与完全抗原混合，免疫剂量为200μl/只，加强免疫时用弗氏不完全佐剂与完全抗原混合，免疫剂量为200μl/只。在试验第一天初免后，隔7天加强免疫一次，第二次免疫后每隔10天加强免疫一次，共进行6次加强免疫。每次加强免疫后采血，用ELISA法检测是否有抗体产生。
　　 试验二选用体重为87.77±1.61g的SD大鼠60只，随机分为4个处理，每个处理5个重复，每个重复3只大鼠。处理一为对照组，不注射任何抗体；处理二、处理三和处理四为试验组，分别注射PYY抗体血清50μl/只、100μl/只和200μ1/只。每隔7天注射一次，共注射3次，试验期为21天。整个试验期间，试验大鼠自由采食和饮水。试验结束后，从颈部取血，并取出大鼠的胰脏、十二指肠和胃。测定血清中的PYY、胰岛素、瘦素、胃泌素和神经肽Y的含量，测定大鼠胰脏、十二指肠中淀粉酶、脂肪酶和胃蛋白酶的活力。
　　 结果显示：
　　 ①根据电泳结果显示，PYY与BSA偶联成功，PYY-BSA的分子量大于BSA的分子量：
　　 ②根据ELISA的检测显示，PYY抗体血清在第六次免疫后呈阳性，说明在兔子体内产生了PYY抗体。
　　 ③注射不同剂量的PYY抗体对大鼠平均体重的影响。在0-7天，每个处理组的大鼠平均体重没有显著差异(P＞0.05)；在8-14天，处理二、处理三和处理四组的平均体重显著高于处理一组(P＜0.05)；在15-21天，处理二、处理三和处理四的平均体重显著高于处理一(P＜0.05)。
　　 ④注射不同剂量的PYY抗体对大鼠平均日采食量的影响。在0-7天，处理二、处理三和处理四的平均日采食量显著高于处理一(P＜0.05);在8-14天，处理二、处理三和处理四的平均日采食量显著高于处理一（P＜0.05）；在15-21天，处理三和处理四显著高于处理一和处理二(P＜0.05)。
　　 各处理组在不同阶段的料肉比都有所降低。在同一阶段，处理四的料肉比比其它几组的都高，但各组差异不显著(P＞0.05)。
　　 ⑤注射不同剂量的PYY抗体对饲料养分利用率的影响。对于干物质的利用率，各组间差异不显著(P＞0.05)，处理一组对干物质的利用率最高。处理二，处理三和处理四组对粗蛋白利用率显著高于处理一(P＜0.05)；处理二、处理三和处理四对能量的利用率显著高于处理一(P＜0.05)。
　　 ⑥NPY、瘦素、胃泌素和胰岛素随着PYY抗体注射剂量的增高而增高，但是各组间差异都不显著（P＞0.05）。对于注射高剂量的PYY抗体的处理四组，以上各种激素在血清中的含量都是最高的。
　　 血清PYY水平随注射剂量的增加而减少，各组间差异不显著(P＞0.05)。
　　 ⑦胰脂肪酶、胰淀粉酶的比活力随着PYY抗体注射剂量的增加而升高。胰脂肪酶的活力在各处理组间差异不显著（P＞0.05），处理四中的胰脂肪酶活力最高；处理四的胰淀粉酶比活力显著高于其它几组(P＜0.05)。
　　 ⑧十二指肠脂肪酶和淀粉酶的比活力随着PYY抗体注射剂量的增加而升高。处理三和处理四的十二指肠脂肪酶的活力显著高于处理一和处理二（P＜0.05)，处理四的十二指肠脂肪酶活力最高；十二指肠淀粉酶活力在各处理组间差异不显著(P＞0.05)，处理四中的十二指肠淀粉酶活力最高。
　　 ⑨胃蛋白酶的比活力随着PYY抗体注射剂量的增加而降低，各处理组间差异不显著（P＞0.05），处理一的胃蛋白酶活力最高。
　　 结果表明，通过化学方法可以将PYY和BSA偶联制成完全抗原，用合成的完全抗原主动免疫家兔，可以产生含有PYY抗体的血清。
　　 用PYY抗体血清免疫大鼠，可以提高大鼠的生产性能，其可能机制是PYY抗体血清特异性的中和了部分内源性PYY，减弱了PYY对大鼠的生物学作用。注射高剂量的PYY抗体血清对大鼠的影响要大于其它处理组。

目录

文摘

英文文摘

前言

1．文献综述

1.1 PYY概述

1.1.1 PYY的发现及分布

1.1.2 PYY的合成、分泌

1.1.3 PYY的受体

1.2 PYY的生物学作用

1.2.1 PYY对采食的影响

1.2.2 PYY与肥胖的关系

1.2.3 PYY与其他胃肠激素的关系

1.2.4 PYY的其他作用

1.3 PYY免疫调控的研究

1.4 有待研究的问题

1.5 研究目的

1.6 试验流程:

试验一 PYY完全抗原制备及免疫抗体的检测

1．试验目的

2．材料与方法

2.1 材料

2.2 试验方法

3. PYY完全抗原的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外分光光度法鉴定

3.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

4．动物试验

4.1 动物免疫

4.2 间接ELISA工作液

4.3 间接ELISA操作程序

5．试验结果

5.1 完全抗原电泳结果

5.2 PYY免疫兔子后血清中PYY抗体的产生规律

6．结果讨论

7．结论

试验二 PYY被动免疫对大鼠生产性能、血液中相关激素水平和组织中消化酶的影响

1 材料与方法

1.1 试验材料

2 试验方法

2.1 饲养管理

2.2 免疫处理

2.3 代谢试验

2.4 考察指标

2.5 数据统计分析

3．试验结果

3.1 对白鼠生产性能的影响

3.2 注射不同剂量的PYY抗体对大鼠养分利用率的影响。

3.3 注射不同剂量PYY抗体对血清激素水平的影响

3.4 注射不同剂量PYY抗体对组织中消化酶的影响

4．结果讨论

4.1 PYY被动免疫对大鼠生产性能的影响

4.2 PYY被动免疫对血清激素的影响

4.3 PYY被动免疫对组织中消化酶的影响

5.结论

全文总结

参考文献

致谢