黄鳝嗜水气单胞菌病和温和气单胞菌病防治研究

摘要

黄鳝(Monopterus albus)不仅有丰富的营养价值，且有重要的药用价值，深受消费者青睐。目前已在除西藏、东三省以外的全国各地养殖，尤其以四川、湖北、江西等地最广。由于黄鳝的人工养殖历史较短，并且以前的研究多集中于繁殖，饲养等方面，因此对黄鳝疾病一直没有有效的防治措施。黄鳝嗜水气单胞菌和温和气单胞菌是危害黄鳝养殖业较为重要的两种疾病，且这两种疾病经常混合感染，因此研制能预防这两种疾病的二联疫苗和有效的复方中草药必将大大促进黄鳝养殖业的发展。本研究从二联疫苗和中药防治两方面对黄鳝疾病的防治进行研究，检测了二联疫苗的免疫效果，中药的体外抑菌效果。
　　 1嗜水气单胞菌与温和气单胞菌最佳灭活条件的优化
　　 选用不同的营养源，不同的培养温度，不同的pH值对嗜水气单胞菌，温和气单胞菌培养条件进行优化，结果表明嗜水气单胞菌最佳培养条件为：普通肉汤中加入1％胰蛋白胨，温度为37℃，pH值为7.5；温和气单胞菌最佳培养条件为：普通肉汤中加入1％胰蛋白胨，温度为28℃，pH值为7.5。将两种细菌扩大培养后按照1：1的比例混合，加入0.2％福尔马林（终浓度），灭活温度28℃，灭活36h制成二联灭活苗的沉淀线最强。
　　 2嗜水气单胞菌与温和气单胞菌二联疫苗对黄鳝的免疫效果
　　 用嗜水气单胞菌、温和气单胞菌菌体制成二联疫苗，以腹腔注射的方式免疫黄鳝。检测免疫黄鳝血清抗体效价、IgM含量、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性、补体C3以及对嗜水气单胞菌，温和气单胞菌攻毒的免疫保护率，评价该二联苗对黄鳝的免疫效果。结果表明二联疫苗免疫黄鳝后诱导的抗体效价在-免后的第4周达到最高，然后下降，加强免疫后在第6周达到最高，随后开始下降，抗嗜水气单胞菌和温和气单胞菌的效价均为2667，而空白对照组在整个试验期间未能检测到抗嗜水气单胞菌、抗温和气单胞菌效价；免疫后黄鳝的IgM含量，血清溶菌酶和超氧化物岐化酶，补体C3分别为：0.5020±0.008mg/mL，12.27±0.17ug/mL，33.96±0.15U/mL，0.1054±0.0049mg/mL。免疫8周后分别用两种病原菌攻毒，二联疫苗对黄鳝嗜水气单胞菌、温和气单胞菌攻毒的免疫保护率分别为56.67％和46.67％。试验表明该二联疫苗对黄鳝两种细菌病可起到一定的预防效果。
　　 3复合佐剂对黄鳝的免疫效果
　　 二联苗＋复合佐剂组能更好地增强黄鳝的非特异性和特异性免疫，对嗜水气单胞菌与温和气单胞菌攻毒后的免疫保护率分别为63.67％，53.67％。与无佐剂组相比免疫保护率提高了7％。研究结果表明黄芪多糖和左旋咪唑能更好地增强嗜水气单胞菌和温和气单胞菌的免疫原性和免疫保护力。
　　 4中草药对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌抑菌效果
　　 采用牛津杯法和二倍稀释法，选择五倍子、黄芩、杨树花、连翘、大黄等10种中草药对患病黄鳝上分离到的10株嗜水气单胞菌和1株温和气单胞菌进行了体外抑菌试验。在此基础上，按照中兽医配伍的特点初步筛选了5种中草药组成4个复方(A、B、C、D)，并选择1株嗜水气单胞菌和1株温和气单胞菌进行体外抑菌试验。结果表明两种病原菌对五倍子、黄芩、连翘、杨树花、大黄较为敏感，其中五倍子的抑菌效果较显著，抑菌圈直径大于20mm；4个复方均具有较好的抑菌作用，且复方A效果最好。

目录

文摘

英文文摘

第一章 文献综述

1.1 黄鳝细菌性疾病研究进展

1.1.1 出血病

1.1.2 体表溃疡病

1.1.3 肠炎病

1.1.4 细菌性烂尾病

1.2 水生动物嗜水气单胞菌和温和气单胞菌疫苗研究进展

1.2.1 水生动物嗜水气单胞菌疫苗研究进展

1.2.2 水生动物温和气单胞菌疫苗研究进展

1.2.3 联合疫苗的研究

1.2.4 鱼用疫苗存在的问题

1.3 中药对水产动物疾病的药效学研究

1.3.1 对病原体的直接抑制或杀灭作用

1.3.2 对水生动物疾病防治的研究

1.3.3 提高水生动物免疫力的研究

1.4 研究目的与意义

第二章 黄鳝嗜水气单胞菌和温和气单胞菌二联灭活苗的研究

2.1 材料

2.1.1 试验材料

2.1.2 主要仪器

2.1.3 主要试剂及配制方法

2.2 方法

2.2.1 嗜水气单胞菌(AH)、温和气单胞菌(AS)二联疫苗的制备

2.2.2 佐剂的制备

2.2.3 免疫原的制备

2.2.4 免疫原的安全性检测

2.2.5 免疫与采血

2.2.6 免疫指标的检测

2.3 结果

2.3.1 疫苗培养条件的优化

2.3.2 疫苗灭活条件的优化

2.3.3 最佳培养条件下疫苗的制备

2.3.4 免疫指标的检测

2.4 讨论

2.4.1 福尔马林灭活条件的研究

2.4.2 二联疫苗免疫效果的研究

2.4.3 佐剂对黄鳝免疫作用的影响

2.5 小结

第三章 中草药对黄鳝嗜水气单胞菌和温和气单胞菌的体外抑菌试验

3.1 材料

3.1.1 菌株

3.1.2 中草药

3.1.3 培养基

3.1.4 仪器设备

3.2 方法

3.2.1 中药的提取

3.2.2 菌悬液的制备

3.2.3 体外抑菌活性测定

3.2.4 最低抑菌浓度（MIC值）的测定

3.3 实验结果

3.3.1 各种中药对嗜水气单胞菌抑菌圈的测定

3.3.2 各种中药对嗜水气单胞菌最低抑菌浓度（MIC值）

3.3.3 各种中药对温和气单胞菌体外抑菌结果

3.3.4 复方中药对嗜水气单胞菌，温和气单胞菌抑菌圈的测定

3.4 讨论

3.4.1 单味中药的抑菌效果研究

3.4.2 复方中药的抑菌效果研究

3.4.3 测定中草药提取物抑菌效果方法的选择

3.5 小结

第四章 结论与创新点

4.1 结论

4.2 创新点

参考文献

致谢