CVI988/Rispens疫苗对MDV四川NC株的免疫保护的研究

摘要

马立克病(MD)是由α-疱疹病毒科的马立克病毒(MDV)引起鸡死亡的高度传染性肿瘤病，以淋巴组织的增生和肿瘤形成为特征，外周神经、性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤发生单核细胞浸润为主。针对国内爆发现状，马立克病已被认为是禽传染病中最严重的疾病之一。疫苗防控是本病的关键，近年来常有免疫鸡群发生马立克的报道。四川某经CVI988/Rispens疫苗免疫后鸡群爆发马立克病，发病率和死亡率高达30％和20％。进行MDV的分离鉴定，评价现有疫苗株对临床分离株的免疫保护效果，对我国MDV的防治有重要的参考意义。
　　本试验从该鸡场分离到一株适应DEF生长的马立克病毒（MDVNC株）。对Meq基因测序分析，观察病毒的遗传变异;通过免疫保护实验观察CVI988/Rispens和HVT疫苗对NC株的保护效果。结果表明: Meq氨基酸分别在71、80、115、139、176位的突变符合国内强毒MDV的突变特点。HVT疫苗组攻毒后31d开始发病，发病率为40％，死亡率为6.9％，肿瘤发生率为6.9％，对鸡只的保护指数为58;CVI988/Rispens组发病率为51.7％，31d出现死亡，死亡高峰期为攻毒后41～51d，死亡率为20.7％，肿瘤发生率为34.5％，对鸡只的保护指数为43。而攻毒对照组鸡19d开始发病，最早30d出现死亡，发病高峰期为攻毒后30～53d，发病率为93.3％，死亡率为36.6％，肿瘤发生率为50.0％;同居感染组15d开始发病，最早24d出现死亡，死亡高峰期为攻毒后22～30d，发病率为83.3％，死亡率为66.7％，肿瘤发生率为36.7％。
　　结果表明，该毒株引起的发病率、死亡率以及HVT疫苗的保护指数根据OIE的标准，NC株毒力介于强毒和超强毒之间。而CVI988/Rispens疫苗的保护指数低于HVT疫苗组且差异显著(P＜0.05)，CVI988/Rispens疫苗组的发病率和死亡率与攻毒对照组差异不显著(P＞0.05)，HVT疫苗保护力高于CVI988/Rispens疫苗，结果与其它报道有差异。本试验所用的CVI988/Rispens疫苗为多次代疫苗，该疫苗株在经过多次传代后，对MDV的免疫保护力也许会下降;抑或流行株的抗原变异致使免疫保护力下降都有可能是导致该结果的原因。对鸡只血液和羽毛囊的带毒监测显示，攻毒后7～60d均可稳定的检测出鸡只带毒。另外实验发现经弱毒苗CVI988/Rispens免疫后再攻毒，肿瘤主要发生在心脏，此结果对观察MDV流行株的致瘤谱的变异有参考意义。

目录

声明

摘要

符号说明

第一部分 文献综述及选题的目的意义

1．马立克病的研究进展

1．1 病原学概述

1．2 MDV的基因组

1．3 MDV发病机理

1．4 MD流行病学

1．5 临床症状和病理变化

1．6 诊断技术

1．7 防控

2 研究的目的意义

第二部分 实验研究

1．材料

1．1 病毒

1．2 SPF鸡、鸡胚、鸭胚

1．3 载体与受体菌

1．4 主要试剂

1．5 主要仪器设备

1．6 试剂配制

1．7 引物设计

2．方法

2．1 病料检测

2．2 病毒分离与鉴定

2．3 Meq基因的序列测定分析

2．4 免疫保护实验

2．5 指标测定

2．6 数据统计

3 结果和分析

3．1 PCR检测结果

3．2 NC株的分离培养和滴度测定

3．3 致病基因Meq的扩增和序列分析

3．4 MDV疫苗免疫保护实验结果

4．讨论

4．1 MDV NC株Meq基因

4．2 MDV NC株毒力检测及CVI988／Rispens疫苗的保护力

4．3 鸡外周血和羽毛囊中MDV的带毒规律

4．4 肿瘤的体内分布

5．结论

参考文献

附录

致谢