RS4型甘薯抗性淀粉对齐口裂腹鱼生长及肠道微环境的影响

摘要

本文通过饲喂添加不同剂量的CSPS的饲料给齐口裂腹鱼研究CSPS对齐口裂腹鱼生长及肠道微环境的影响。柠檬酸甘薯淀粉酯(CSPS)由本实验室自制并测定其RS含量。然后通过选用平均体重为75.47±5.43g的齐口裂腹鱼共180尾，随机分为5组，每组3个重复，每个重复12尾鱼。空白对照组饲喂基础日粮，其它各试验组饲喂分别添加了3.5％、7％、14％及28％的CSPS的日粮。连续饲喂60d后解剖齐口裂腹鱼，称重后并计算饵料系数、特定生长率，取出肠管测定肠道形态结构指标，并对肠道菌群进行PCR-DGGE及FQ-PCR分析。主要研究结果如下:
　　(1)通过Englyst法测定SPS及CSPS的RS含量为:4.10％、45.91％，可见与SPS相比，CSPS的RS含量有明显的增加。
　　(2)相对于对照组而言，各试验组的体重与特定生长率均有所增加。末体重:CSPS添加量为7％及14％的试验组与对照组相比，增加了11.72％及9.84％(P＜0.05);饵料系数:CSPS添加量为7％及14％的试验组与对照组相比，减少了17.39％及13.23％(P＜0.05);特定生长率:CSPS添加量为7％及14％的试验组与对照组相比，增加了53.33％及46.67％(P＜0.05)。表明齐口裂腹鱼日粮中添加CSPS能显著提高的其体重、饵料系数及特定生长率。其中CSPS添加量为7％及14％的试验组效果尤为明显（P＜0.05）。
　　(3)前肠:14％及28％剂量组前肠粘膜皱褶高度显著低于空白对照组(P＜0.05);7％及28％剂量组前肠粘膜上皮高度显著低于对照组(P＜0.05）;7％、14％CSPS剂量组前肠内环肌层厚度显著低于对照组(P＜0.05）;7％、14％及28％剂量组前肠外纵肌层厚度显著低于对照组（P＜0.05）。与空白对照组相比，添加CSPS的各试验组的齐口裂腹鱼中后肠道组织形态结构（粘膜皱褶高度、粘膜上皮高度、粘膜下层厚度、内环肌层厚度、外纵肌层厚度）差异均不显著(P＞0.05）。说明CSPS的添加对齐口裂腹鱼肠道结构有局部损伤。试验组中齐口裂腹鱼的前肠粘膜皱褶高度有明显降低。
　　(4)14％及28％剂量组的前肠杯状细胞显著低于对照组(P＜0.05);而各剂量组中后肠杯状细胞数差异不显著。此外，在同一组中，齐口裂腹鱼肠道杯状细胞从前肠、中肠到后肠逐步递增。这说明齐口裂腹鱼日粮中添加高剂量的CSPS会显著降低齐口裂腹鱼前肠杯状细胞的数量。
　　(5)聚类分析表明:前肠中，14％与28％剂量组相似度最高，为75.0，被聚为一类，而对照组与其它组相似度最低，为50.0。在中肠，3.5％剂量组与对照组相似度最高，为76.0，被聚为一类，7％剂量组与其它组相似度最低，为55.0。后肠中，3.5％与7％的剂量组相似度最高，为70.0，而28％的试验组与其它组相似度最低，为55.0。这说明高剂量的CSPS会显著改变齐口裂腹鱼的肠道菌群结构。
　　(6)荧光定量分析:芽孢杆菌属:与基础组比较，CPSP添加量为14％的试验组提高了芽孢杆菌属在总细菌中所占的比例(P＞0.05); CPSP添加量为3.5％、7％及28％的试验组也显著提高了芽孢杆菌属在总细菌中所占的比例(P＜0.05)。这说明齐口裂腹鱼日粮中添加CPSP会显著提高芽孢杆菌属在总细菌中所占的比例。
　　大肠杆菌属:与基础组比较，CPSP添加量为7％的试验组降低了大肠杆菌属在总细菌中所占的比例(P＞0.05); CPSP添加量为3.5％、14％及28％的试验组显著提高了大肠杆菌属在总细菌中所占的比例(P＜0.05)。这说明齐口裂腹鱼日粮中添加合适计量的CPSP才会显著降低大肠杆菌属在总细菌中所占的比例。

目录

声明

摘要

符号说明

1 文献综述

1．1 抗性淀粉(RS)的研究进展

1．1．1 抗性淀粉定义与种类

1．1．2 抗性淀粉对肠道健康的影响

1．1．3 抗性淀粉其他功能

1．3 鱼肠道菌群的概述

1．3．1 鱼肠道菌群的形成

1．3．2 鱼肠道菌群的特性、数量和组成

1．3．3 鱼肠道菌群的分布

1．3．4 鱼肠道菌群的作用

1．4 鱼肠道菌群的研究方法

1．4．1 传统培养法

1．4．2 PCR-DGGE方法

1．4．3 实时荧光定量PCR

1．5 立题依据及意义

1．6 研究内容

2 材料与方法

2．1 主要原料及试剂

2．2 主要试剂的配制

2．3 主要仪器及设备

2．4 试验方法

2．4．1 CSPS的制备

2．4．2 CSPS抗性淀粉的定量测定

2．4．3 动物分组与管理

2．4．4 齐口裂腹鱼基础生长指标的测定

2．4．5 齐口裂腹鱼肠道内容物及肠组织的采集

2．4．6 齐口裂腹鱼肠道切片的制作

2．4．7 齐口裂腹鱼肠道形态的观察和测量

2．4．8 齐口裂腹鱼肠道菌群变化的DGGE分析

2．4．9 齐口裂腹鱼肠道大肠杆菌属及芽孢杆菌菌属变化的FQ-PCR分析

2．4．10 数据及图像的处理分析

3 结果与分析

3．1 CSPS的RS定量

3．2 CPSP对齐口裂腹鱼生长的影响

3．3 CPSP对齐口裂腹鱼肠道形态结构的影响

3．3．1 对前肠形态结构的影响

3．3．2 对中肠形态结构的影响

3．3．3 对后肠形态结构的影响

3．4 CSPS对齐口裂腹鱼杯状细胞数量的影响

3．5 CSPS对高齐口裂腹鱼肠道菌群多样性的影响

3．5．1 齐口裂腹鱼肠道菌群16S rDNA的V3区PCR扩增结果

3．5．2 肠道菌群PCR-DGGE指纹图谱的建立及分析

3．6 CSPS对高齐口裂腹鱼肠道大肠杆菌菌属及芽孢杆菌菌属的影响

3．6．1 引物鉴定

3．6．2 实时荧光定量检测不同剂量CSPS对齐口裂腹鱼菌群的相对定量检测

4 讨论

4．1 CSPS对齐口裂腹鱼生长和肠道形态结构的影响

4．2 对齐口裂腹鱼杯状细胞的影响

4．3 对齐口裂腹鱼肠道菌群的影响

5 结论与展望

5．1 研究结论

5．2 研究展望

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文