山梨醇对马铃薯试管苗低温保存的影响研究

摘要

由于离体组织在保存过程中，存在继代时间短的问题，且超低温保存的研究还处于初级阶段，使得马铃薯种质资源利用脱毒试管苗保存的方法研究进展缓慢。本研究以马铃薯品种费乌瑞它、川芋117试管苗为材料，对其在20 g·L-1山梨醇结合4℃低温条件下的保存时间和生理变化以及保存后再生植株遗传稳定性进行了深入研究。
　　主要研究结果如下:
　　1.MS培养基内添加不同浓度的矮壮素、山梨醇和甘露醇，结合4℃的低温处理，结果表明，添加20 g·L-1山梨醇结合4℃的低温处理延长马铃薯试管苗继续时间的效果显著，可将保存时间由100d延长到300d以上，且保存后的马铃薯材料，重新转接到新的MS培养基中，能很快恢复生长。
　　2.以常温不加任何试剂为对照，对添加20 g·L-1山梨醇处理的马铃薯试管苗在低温保存过程中的生理变化进行了初步研究，发现所有处理随着培养时间的延长，试管苗逐渐老化，叶绿素和游离脯氨酸含量均逐渐下降，但20 g·L-1山梨醇结合4℃低温处理，能显著延缓试管苗各生理指标的下降速度，且低温能显著延缓试管苗的生长，降低其老化速度;丙二醛含量随时间的延长而上升，20 g·L-1山梨醇结合4℃的低温处理下丙二醛含量上升缓慢，显著低于对照。
　　3.低温离体保存后的马铃薯试管苗经复壮培养后，在形态指标上无显著差异，通过RAPD技术对该再生植株进行遗传稳定性检测，共筛选了200条随机引物，检测结果表明，无显著的变异条带，说明马铃薯试管苗在经过山梨醇处理和低温保存后，其遗传物质可能没有发生改变。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 植物种质资源保存研究

1．2 种质资源离体保存技术

1．3 马铃薯种质资源研究

1．4 马铃薯离体保存研究进展

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．2 试验方法

2．3 复壮检测

2．4 RAPD技术检测离体保存后马铃薯再生植株的遗传稳定性

2．4．1 DNA的提取和检测

2．4．2 RAPD检测低温保存后的马铃薯再生植株的遗传稳定性

3 结果与分析

3．1 不同试剂对马铃薯试管苗农艺性状的影响

3．2 山梨醇低温离体保存过程中马铃薯试管苗的生理变化

3．2．1 马铃薯株高、根长、叶片数的变化

3．2．2 叶绿素含量的变化

3．2．3 游离脯氨酸(Pro)含量的变化

3．2．4 丙二醛(MDA)含量的变化

3．3 复壮性状变化

3．4 RAPD技术检测离体保存后马铃薯再生植株的遗传稳定性

4 讨论

4．1 不同试剂对延长马铃薯试管苗离体保存的继代时间的影响

4．2 低温保存过程中马铃薯试管苗抗性生理指标的变化

4．3 RAPD标记检测低温保存后马铃薯种质的遗传稳定性

5 结论

参考文献

致谢