饲粮添加鼠李糖乳酸杆菌GG对轮状病毒攻毒仔猪免疫功能和肠道健康的影响

摘要

本研究旨在探讨鼠李糖乳酸杆菌GG（Lactobacillus rhamnosus GG，LGG）对轮状病毒(rotavirus，RV)感染影响断奶仔猪免疫功能和肠道健康的缓解作用。试验选取24头平均体重为（6.69+0.32）kg健康的21日龄断奶的“杜×长×大”去势公猪，采用2×2因子试验设计，试验因子分别为饲粮添加LGG（0和109 cfu/kg）和RV攻毒（灌服RV或无菌培养液），RV攻毒于试验第15d进行。试验期为19d。
　　结果表明:
　　(1)RV攻毒显著提高了仔猪的腹泻率、平均腹泻指数、料重比(feed/gain，F/G)和血清中尿素氮、轮状病毒抗体水平以及十二指肠、空肠、回肠中轮状病毒抗体和非结构蛋白4水平(P＜0.05)。饲粮添加LGG显著降低了仔猪的腹泻率、平均腹泻指数、F/G及血清中尿素氮水平（P＜0.05）;并可缓解RV攻毒对仔猪血清中尿素氮水平的影响(P＜0.05)。
　　(2)RV攻毒显著降低血清中CD3+T和CD4+T细胞百分率、CD4+/CD8+T细胞的比值与IFN-γ、 IL-4、IgG和IgA的含量以及空肠中IFN-γ、IL-4和sIgA的含量(P＜0.05)，提高血清和空肠中IL-2的含量(P＜0.05)。饲粮添加LGG趋于提高了血清中CD4+T细胞的百分率(P=0.09)，显著提高了血清中IgG和IL-4的含量以及空肠中sIgA、IFN-γ和IL-4的含量(P＜0.05);并可缓解RV攻毒对仔猪血清或空肠中IFN-γ、 IL-2、IL-4和sIgA含量的影响(P＜0.05)。
　　(3)RV攻毒降低了十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比(P＜0.05)，增加了回肠隐窝深度(P＜0.05)。饲粮添加LGG提高了十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比(P＜0.05)，趋于降低了空肠和回肠的隐窝深度(P=0.08);并可缓解RV攻毒对仔猪回肠绒毛高度、空肠隐窝深度以及空肠和回肠绒隐比的影响(P＜0.05)。
　　(4)对照组RV攻毒仔猪，空肠组织上皮细胞间间隙增大，上皮细胞染色质固缩边移，细胞器部分坏死溶解。饲粮添加LGG组RV攻毒仔猪，空肠组织上皮细胞排列紧密，染色质分布均匀，仅少量细胞器坏死。即饲粮添加LGG可缓解RV攻毒对仔猪空肠上皮细胞的损伤，有助于细胞间致密性的维持。
　　(5)RV攻毒降低了空肠粘膜中ZO-1、occludin、Bcl-2、MUC1和MUC2基因的表达(P＜0.05)，趋于提高了Bax基因的表达（P=0.06）。饲粮添加LGG显著提高了空肠粘膜中ZO-1、occludin、Bcl-2、MUC1和MUC2基因的表达(P＜0.05)，显著降低了Bax基因的表达(P＜0.05);并可缓解RV攻毒对仔猪空肠粘膜中Bax基因表达的影响(P＜0.05)。
　　(6)RV攻毒显著提高了回肠和盲肠内容物的pH值及内容物中大肠杆菌的数量(P＜0.05)，显著降低了回肠内容物中乳酸杆菌、双歧杆菌、总菌以及盲肠内容物中乳酸杆菌和双歧杆菌的数量(P＜0.05)。饲粮添加LGG提高了回肠内容物中乳酸杆菌、LGG、总菌以及盲肠内容物中乳酸杆菌、双歧杆菌和LGG的数量(P＜0.05)，降低了回肠内容物的pH值及回肠和盲肠内容物中大肠杆菌的数量(P＜0.05);且可缓解RV攻毒对仔猪回肠或盲肠内容物pH值及内容物中乳酸杆菌、总菌、双歧杆菌和大肠杆菌数量的影响(P＜0.05)。
　　(7)RV攻毒显著提高了十二指肠、空肠、回肠和血清中丙二醛水平（P＜0.05），降低了空肠中总超氧化物歧化酶及十二指肠、空肠、回肠和血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性(P＜0.05)，降低了空肠和血清中总抗氧化能力(P＜0.05)。添加LGG显著降低了空肠中丙二醛水平(P＜0.05)，提高了空肠中总超氧化物歧化酶和血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性(P＜0.05)，提高了空肠和血清中总抗氧化能力(P＜0.05);并可显著缓解RV攻毒诱导仔猪的空肠或血清中丙二醛、总超氧化物歧化酶和总抗氧化能力的影响(P＜0.05)。
　　综上所述，RV感染会诱导仔猪发生严重腹泻，导致机体氧化应激、免疫功能下降及肠道损伤，进而导致仔猪生产性能降低。而饲粮添加LGG可以降低仔猪的F/G，并可缓解RV感染诱导的仔猪腹泻，这可能源于LGG可改善仔猪机体免疫功能、机体（尤其是肠道）抗氧化能力和肠道屏障功能。

目录

论文说明

声明

摘要

缩略符号表(Abbreviations)

前言

第一章 文献综述

1 轮状病毒

1．1 研究发展史

1．2 理化性质

1．3 形态结构

1．4 细胞培养

1．5 RV对机体免疫功能的影响

1．6 RV对机体肠道健康的影响

1．7 营养方式缓解仔猪RV感染诱导的应激

2 乳酸杆菌

2．1 乳酸杆菌概述

2．2 鼠李糖乳酸杆菌概述

2．3 鼠李糖乳酸杆菌的功能研究

3 存在的问题

第二章 研究的内容、目的意义和技术路线

1 研究的内容

2 研究目的及意义

3 技术路线

第三章 试验研究

1 材料和方法

1．1 试验材料

1．2 试验动物与设计

1．3 试验饲粮及营养水平

1．4 饲养管理

1．5 RV培养与接种

1．6 试验所需仪器和试剂

1．7 样品的采集与处理

1．8 测定指标与方法

1．9 数据处理与分析

2 结果与分析

2．1 生产性能

2．2 腹泻情况

2．3 RV-Ab和NSP4含量的检测

2．4 血液免疫功能

2．5 肠道屏障

2．6 血清及肠道抗氧化能力

3 讨论

3．1 动物攻毒模型的构建

3．2 饲粮添加LGG对RV攻毒仔猪生产性能的影响

3．3 饲粮添加LGG对RV攻毒仔猪血液免疫功能的影响

3．4 饲粮添加EGG对RV攻毒仔猪肠道屏障功能的影响

3．5 饲粮添加LGG缓解RV攻毒对仔猪肠道健康影响的机制

4 结论

第四章 创新点及有待进一步研究的问题

1 创新点

2 有待进一步研究的问题

参考文献

致谢

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