鸡传染性支气管炎病毒Sczy3株细胞适应株的培育及其免疫效力的评价

摘要

鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis，IB)是鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病，由鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus，IBV)导致[1]。该病毒具有高度变异性，血清型众多，且不同血清型之间仅有部分交叉反应甚至不存在交叉反应性。国内外主要采用弱毒疫苗接种对IB进行预防，但现有的传统疫苗对目前流行毒株仅能提供部分免疫保护。因此，为制定有效的免疫程序和为鸡群提供坚实的保护，应选择地方分离毒株或与流行毒株同一血清型毒株研制的疫苗。
　　Sczy3是本实验室于2009年分离的一株LX4型的IBV毒株，利用鸡胚肾细胞(CEK)将其连续传至100代(C100)以致弱，希望制备出一株IB弱毒疫苗的候选株。试验结果显示:毒株在CEK细胞传代过程中，毒株能够高度适应CEK细胞，并能出现合胞体、空斑等典型病变。此后，将C100代毒接种后非免疫雏鸡群未见临床发病症状，发病率和死亡率均为0％，这说明Sczy3毒株在CEK细胞连续传至C100代时已充分致弱。通过荧光定量PCR检测发现，不同代次的病毒在CEK细胞中CEK内增殖变化曲线呈单峰状，接毒后12-36h时是病毒增殖的高峰期，并于36h病毒滴度达到最高，但从接毒后36h至72h内病毒滴度则逐渐降低。在CEK细胞中大致传10代，Sczy3即可适应细胞，且病毒滴度逐渐升高，但在感染CEK细胞36h时，则呈现出早期代次的Sczy3病毒滴度要高于中、晚期代次的病毒滴度(病毒滴度:C20＞C50＞C90)。
　　为评价Sczy3 C100对同源毒株及当前流行毒株的免疫保护效力。采用Sczy3C100、4/91和H120商品化疫苗分别接种7日龄的非免疫雏鸡，经二免后2周分别用Sczy3 P3和SCTW分离株进行攻毒，统计各试验组鸡群抗体效价、攻毒后临诊症状、气管和肾脏的带毒情况等指标。结果显示:免疫组鸡群免疫后抗体效价均为阳性，Sczy3 C100对同源毒株可提供有效免疫保护;而对不同基因型毒株SCTW可提供一定临床保护，但鸡群气管和肾脏的病毒检出率稍高于Sczy3 P3攻毒组。目前我国有众多的IBV基因型流行，故而IBV新疫苗的研究任重道远。

目录

声明

摘要

英文缩略词对照表

第一部分 文献综述和选题目的意义

1 概论

1．1 流行概况

1．2 病原学

1．3 IBV的基因结构

1．4 结构蛋白

1．5 IBV的遗传变异机制

1．6 培养特性

2 IB疫苗研究进展

2．1 IB灭活疫苗

2．2 IB弱毒疫苗

2．3 IB亚单位疫苗

2．4 IB载体疫苗

2．5 IB DNA疫苗

3 荧光定量PCR研究进展

4 实验目的及意义

第二部分 试验内容

试验一 鸡传染性支气管炎病毒Sczy3细胞适应株的培育

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

试验二 建立荧光定量RT-PCR方法对IBV Sczy3 CEK细胞适应株的增殖规律进行研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验三 Sczy3 C100免疫保护效力的评价

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

结论

参考文献

致谢