鸭传染性浆膜炎灭活疫苗免疫产蛋种鸭母源抗体及其保护力

摘要

本研究开展了建立基于脂多糖的间接酶联免疫吸附试验(LPS-ELISA)和基于鸭疫里默氏菌(RA)超声裂解物的间接酶联免疫吸附试验(PRO-ELISA)检测血清1型鸭疫里默氏菌(RA-1)抗体、鸭传染性浆膜炎灭活疫苗免疫产蛋种鸭后其种蛋卵黄及6日龄雏鸭血清中LPS-ELISA抗体/PRO-ELISA抗体/试管凝集试验抗体的消长规律、雏鸭母源抗体水平与抵抗RA-1强毒攻击的关系评估等，获得如下结果:
　　1、检测RA-1抗体的LPS-ELISA和PRO-ELISA方法建立
　　LPS-ELISA∶ LPS最佳包被浓度为12.50 ng/μL，血清最佳稀释浓度为1∶800，酶标二抗最佳稀释度为1∶400。
　　PRO-ELISA∶ RA超声裂解抗原最佳包被浓度为1.56 ng/μL，血清最佳稀释浓度为1∶400，酶标二抗最佳稀释度为1∶800。
　　以上两种方法与经典的RA试管凝集试验具有较好的平行关系。
　　2、鸭传染性浆膜炎灭活疫苗免疫种鸭后抗体传至卵黄及下一代6日龄雏鸭的消长规律
　　60只4月龄产蛋种鸭注射0.5mL鸭传染性浆膜炎灭活疫苗，于第3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36天收集当天所产的鸭蛋，每个时间点每次收集30个，其中10个鸭蛋提取卵黄抗体，20个鸭蛋用来孵化雏鸭，每批次雏鸭孵育出来后于6日龄采集血液并分离血清，设60只4月龄产蛋种鸭不免疫疫苗对照。用试管凝集试验和两种不同的ELISA方法检测抗体的水平，结果表明:疫苗免疫种鸭后第6天即可检测出卵黄抗体，第27天抗体水平达到最高，第33天后抗体水平开始缓慢降低，血清抗体水平与卵黄抗体水平变化规律基本一致，但血清抗体明显偏低，对照组呈阴性。
　　3、鸭传染性浆膜炎灭活疫苗免疫种鸭后下一代雏鸭母源抗体消长规律与雏鸭抵抗大剂量RA-1强毒攻击的保护力
　　120只4月龄产蛋种鸭注射0.5mL鸭传染性浆膜炎灭活疫苗，收集免疫后第27-33天鸭蛋孵育雏鸭，设80只4月龄产蛋种鸭不注射疫苗为对照组。开展两项试验:(1)抗体检测:采集1、3、6、9、12、15、18、21日龄雏鸭血清，用试管凝集试验和两种不同的ELISA方法检测抗体的效价;(2)攻毒保护试验:选3、6、9、12、15、18、21日龄雏鸭，进行攻毒，每个日龄选8只作为试验组，每只雏鸭肌肉注射0.5mL含菌量为109CFU/mL RA-1强毒;对照组每个日龄选6只雏鸭注射相同剂量菌液;空白组每个日龄选4只雏鸭注射等量生理盐水。结果表明:雏鸭体内母源抗体随着日龄增长呈下降趋势，9日龄时雏鸭母源凝集抗体在1∶8以上，18日龄时母源抗体消失。9和12日龄雏鸭对大剂量RA-1强毒攻击仍分别有75％(6/8)和50％(4/8)保护，而无母源抗体保护的雏鸭100％(6/6)死亡。因此，鸭传染性浆膜炎灭活疫苗产蛋前免疫雏鸭，母源抗体对12日龄以内雏鸭具有较好的保护力，且母源抗体水平高低与雏鸭保护率大小呈正相关。

目录

声明

摘要

缩略词表

一 文献综述

1 前言

1．1 鸭传染性浆膜炎概述

1．2 病原学

1．3 流行病学

1．4 临诊症状和病理变化

1．5 诊断

2 鸭传染性浆膜炎防治研究进展

2．1 鸭传染性浆膜炎的预防

2．2 鸭传染性浆膜炎的药物防治

2．3 鸭传染性浆膜炎的疫苗预防

3 鸭传染性浆膜炎检测方法的研究进展

3．1 免疫荧光检测技术

3．2 PCR检测方法

3．3 鸭传染性浆膜炎抗体的检测方法

4 本试验研究的目的意义

二 试验内容

1 试验材料

1．1 试验动物、菌株和试剂

1．2 主要仪器

2 试验方法

2．1 LPS-ELIsA方法的建立和PRO-ELISA方法优化

2．2 免疫种鸭后不同时间点卵黄抗体及后代雏鸭血清抗体的消长规律

2．3 后代雏鸭母源抗体效价测定及攻毒保护试验

3 结果

3．1 血清1型鸭疫里默氏菌(RA-1)阳性血清制备

3．2 建立LPS-ELISA条件优化结果

3．3 PRO-ELISA条件的优化

3．4 试管凝集试验检测种蛋卵黄和雏鸭血清抗体效价

3．5 间接ELISA检测卵黄抗体效价和雏鸭体内血清抗体效价

3．6 雏鸭出壳后母源抗体消长规律

3．7 雏鸭攻毒保护试验

4 讨论

三 结论

参考文献

致谢