叶酸对中期草鱼生长和肠道免疫的影响及其调控机制研究

摘要

本试验旨在研究饲粮添加不同水平叶酸对生长中期草鱼生长性能、肠道免疫能力、紧密连接和抗氧化能力的影响及其作用机制。将初始体重为267.69±0.87 g的体格均匀、健康的草鱼随机分配到18个网箱中，设置6个叶酸水平，各组间初始体重差异不显著（P＞0.05），进行8周的动物实验，实验期间各处理分别投喂叶酸含量为0.10（对照组）、0.47、1.03、1.48、1.88和3.12 mg/kg的饲粮。
　　本研究结果显示:饲粮中适宜水平的叶酸显著提高中期草鱼的末重、增重百分比(PWG)、特异性增长率、摄食量和饲料效率(P＜0.05)。适宜水平叶酸显著提高草鱼肠道胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性、Na+/K+-ATP酶、碱性磷酸酶、肌酸激酶(CK)和γ-谷氨酰转移酶活性(P＜0.05)，同时，适宜水平叶酸上调前肠、中肠和后肠CK和Na+/K+-ATPase alpha subunit isoform1基因表达(P＜0.05)，但是对肠道Na+/K+-ATPase alpha subunit isoform8基因表达无影响(P＞0.05)。进一步研究发现，适宜水平叶酸上调肠道雷帕霉素靶蛋白和S6蛋白激酶1基因表达，但是下调草鱼肠道eIF4E结合蛋白基因表达(P＜0.05)。此外，适宜水平叶酸显著增加草鱼肠道酸性磷酸酶和溶菌酶活性以及补体C3的含量;显著下调草鱼肠道促炎细胞因子白介素1β、白介素8、肿瘤坏死因子α、信号分子核因子κBp65、IκB激酶(IKK)α、IKK-β和IKK-γ的基因表达(P＜0.05);显著上调肠道抗炎细胞因子白介素10、转化生长因子β和核因子κB抑制蛋白(IκB)的基因表达(P＜0.05)。同时，适宜水平叶酸显著上调occludin、ZO-1和claudin-b在草鱼肠道的基因表达（P＜0.05），显著下调claudin-15、肌球蛋白轻链激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶在草鱼肠道的基因表达(P＜0.05)。同时本试验研究发现，适宜水平叶酸降低草鱼肠道的氧自由基、丙二醛和蛋白羰基的含量（P＜0.05），显著增加肠道还原型谷胱甘肽的含量以及铜锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性，显著降低肠道锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性(P＜0.05)。进一步研究发现，适宜水平叶酸显著上调草鱼肠道Cu/ZnSOD、CAT、GPx、GST、GR和核因子相关因子2基因表达，下调肠道MnSOD、Kelch样ECH联合蛋白1a(Keap1a)和Keap1b基因表达(P＜0.05)。在本试验条件下，以PWG为标识，确定中期草鱼(267-747 g)饲粮的叶酸需要量为1.60 mg/kg饲粮。

目录

论文说明

声明

摘要

符号说明

1 选题背景

2 文献综述

2．1 叶酸对鱼类生长性能的影响

2．1．1 叶酸对鱼类肠道生长发育的影响

2．1．2 叶酸对鱼类肠道消化酶和刷状缘酶的影响

2．2 叶酸对鱼类肠道免疫屏障和物理屏障的影响

2．2．1 叶酸对鱼类肠道免疫功能的影响

2．2．2 叶酸对鱼类肠道紧密连接的影响

2．2．3 叶酸对鱼类肠道抗氧化能力的影响

2．2．4 叶酸对鱼类抗氧化酶基因表达及相关信号分子的影响

2．3 水生动物叶酸需要量

2．4 存在问题

3 研究目的和意义

3．1 研究目的

3．2 研究意义

4 试验方案

4．1 试验设计

4．2 饲粮配方及主要营养指标

4．3 试验条件及饲养管理

4．4 测定指标

4．4．1 样品采集

4．4．2 指标测定

4．4．3 实时荧光定量PCR

4．5 计算公式与数据分析

5 试验结果

5．1 叶酸对草鱼生长性能的影响

5．2 叶酸对草鱼肠道发育的影响

5．3 叶酸对草鱼消化酶和刷状缘酶活性的影响

5．4 叶酸对草鱼IGF-1含量的影响

5．5 叶酸对草鱼消化酶和刷状缘酶基因表达的影响

5．6 叶酸对草鱼TOR信号通路表达的影响

5．7 叶酸对草鱼肠道免疫指标的影响

5．8 叶酸对草鱼肠道紧密连接蛋白的影响

5．9 叶酸对草鱼肠道抗氧化指标的影响

6 讨论

6．1 叶酸对中期草鱼生长性能的影响

6．1．1 叶酸对中期草鱼体重、摄食量及饲料效率的影响

6．1．2 叶酸对中期草鱼消化酶和刷状缘酶活性的影响

6．1．3 叶酸对中期草鱼肠道刷状缘基因表达的影响

6．1．4 叶酸可能通过TOR信号通路调节刷状缘酶基因表达

6．2 叶酸对中期草鱼肠道健康的影响

6．2．1 叶酸对中期草鱼肠道抗菌物质的影响

6．2．2 叶酸对中期草鱼肠道炎症反应及相关的信号分子的影响

6．2．3 叶酸对中期草鱼肠道紧密连接蛋白基因表达及其相关分子的影响

6．2．4 叶酸对中期草鱼肠道非酶性和酶性抗氧化能力的影响

6．2．5 叶酸对中期草鱼肠道抗氧化酶基因表达及相关信号分子的影响

6．3 中期草鱼的叶酸需要量

7 结论

参考文献

致谢

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