饲粮中添加磷脂对幼草鱼生长和肠道免疫功能的影响及作用机制研究

摘要

本试验研究了磷脂与幼草鱼生长性能、消化吸收能力、肠道免疫力和物理屏障功能的关系。试验选择初始体重为9.34±0.03 g的健康草鱼1080尾(P＞0.05)，随机分成6个处理组，每个处理组设3个重复，每个重复60尾鱼。6个处理组分别饲喂磷脂水平为0.40％、1.43％、2.38％、3.29％、4.37％和5.42％的半纯合饲粮。
　　试验结果表明，适宜水平磷脂可以显著提高幼草鱼的摄食量(FI)、饲料效率(FE)、增重百分比(PWG)以及蛋白质、脂肪和钙沉积率(P＜0.05)。研究发现，适宜水平磷脂能显著提高幼草鱼肝胰脏和肠道消化酶（糜蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶）活力以及前、中、后肠刷状缘酶（γ-谷氨酰转移酶、肌酸激酶、Na+/K+-ATP酶和碱性磷酸酶）活力(P＜0.05)。同时，适宜水平磷脂能显著提高幼草鱼肝胰脏胰蛋白酶原2、糜蛋白酶原和淀粉酶，前、中、后肠Na+/K+-ATP酶α亚基亚型1(atp1α1a.1)、Na+/K+-ATP酶α亚基亚型8（atp1α1a.4）和肌酸激酶，以及肝胰脏和各肠段中信号分子雷帕霉素靶蛋白(TOR)、核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)、eIF4E-绑定蛋白(4E-BP)和酪蛋白激酶2（CK2）基因的mRNA相对表达量(P＜0.05)。此外，结果表明，适宜水平磷脂能显著提高幼草鱼前中后肠溶菌酶(LZ)、酸性磷酸酶(ACP)活力和补体C3含量，上调白介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)和NF-κB抑制因子α（IBα）基因mRNA表达水平，下调白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、核因子κB p65(NF-κB p65)、IκB激酶β(IKKβ)和IκB激酶γ（IKKγ）基因mRNA表达水平(P＜0.05)。研究还发现，适宜水平磷脂能显著降低幼草鱼肠道丙二醛(MDA)、蛋白羰基(PC)和活性氧(ROS)含量，提高抗超氧阴离子(ASA)抗羟自由基（AHR）、铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)活力和还原型谷胱甘肽(GSH)含量(P＜0.05)。进一步研究发现，适宜水平磷脂能显著提高幼草鱼前中后肠闭锁小带蛋白(ZO-1)、occludin、claudin3、claudin b、claudin c、claudin12基因mRNA表达水平，肠道SOD1、GPx、GR、核因子E2相关因子2（Nrf2）基因mRNA表达水平，下调肠道Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1a(Keap1a)基因mRNA表达水平（P＜0.05）。
　　综上所述，饲粮中添加磷脂能提高幼草鱼生长性能、消化吸收能力、肠道免疫力和物理屏障功能。以PWG、胰蛋白酶活力、AKP活力为标识，用二次回归分析确定出幼草鱼饲粮中磷脂最适水平分别为3.46％、3.56％、3.18％。

目录

论文说明

声明

摘要

符号说明

1 选题背景

2 文献综述

2．1 磷脂的代谢与功能

2．1．1 磷脂在动物体内的代谢

2．1．2 磷脂的消化、吸收、转运

2．1．3 磷脂的生理功能

2．2 磷脂对水生动物生长的影响

2．3 磷脂对水生动物消化吸收功能的影响

2．3．1 磷脂对消化器官生长发育的影响

2．3．2 磷脂对水生动物消化吸收相关酶的影响

2．4 磷脂对水生动物肠道免疫能力的影响

2．4．1 磷脂与对肠道黏膜免疫物质的影响

2．4．2 磷脂对肠道细胞因子的影响

2．5 磷脂对水生动物肠道物理屏障功能的影响

2．5．1 磷脂对肠道紧密连接的影响

2．5．2 磷脂对肠道抗氧化能力的影响

2．6 存在问题

3 本研究的目的和意义

3．1 本研究的内容和目的

3．2 本研究的意义

4 试验方案

4．1 试验设计

4．2 试验饲粮

4．3 试验条件和饲养管理

4．4 观测指标

4．4．1 生长性链指标

4．4．2 体成分分析及蛋白质、脂肪、灰分等沉积率计算

4．4．3 消化器官生长发育指标

4．4．4 消化吸收相关酶活力和胆囊收缩素含量测定

4．4．5 抗氧化状态相关指标测定

4．4．6 肠道黏膜免疫物质的测定

4．4．7 mRNA表达测定

4．5 数据处理与统计分析

5 结果

5．1 生长性能

5．2 体成分及营养物质沉积率

5．3 消化吸收相关指标

5．3．1 消化器官生长发育

5．3．2 消化吸收相关酶活力和胆囊收缩素含量

5．3．3 消化吸收相关酶和信号分子基因mRNA表达

5．4 肠道免疫指标

5．4．1 不同肠段黏膜免疫物质

5．4．2 不同肠段细胞因子mRNA表达

5．4．3 不同肠段免疫相关信号分子mRNA表达

5．5 肠道物理屏障指标

5．5．1 不同肠段紧密连接蛋白及相关信号分子mRNA表达

5．5．2 肠道抗氧化状态

5．5．3 肠道抗氧化酶及相关信号分子mRNA表达

6 讨论

6．1 磷脂对幼草鱼生长的影响

6．2 磷脂对幼草鱼消化吸收功能的影响

6．2．1 磷脂对幼草鱼消化器官生长发育的影响

6．2．2 磷脂对幼草鱼消化吸收相关酶活力的影响

6．2．3 磷脂对幼草鱼消化吸收相关酶基因表达的影响

6．3 磷脂对幼草鱼肠道免疫功能影响

6．3．1 磷脂对幼草鱼肠道黏膜免疫物质的影响

6．3．2 磷脂对幼草鱼肠道细胞因子及相关信号分子基因表达的影响

6．4 磷脂对幼草鱼肠道物理屏障功能的影响

6．4．1 磷脂对幼草鱼肠道紧密连接蛋白的影响

6．4．2 磷脂对幼草鱼肠道抗氧化状态的影响

6．5 幼草鱼饲粮磷脂最适水平

7 结论

参考文献

致谢

硕士攻读期间发表文章