亚硒酸钠对脱氧雪腐镰刀菌烯醇致体外培养猪脾脏淋巴细胞氧化损伤的保护作用研究

摘要

目的：
　　本研究通过体外原代培养猪脾脏淋巴细胞，单独/联合添加脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、亚硒酸钠(Na2SeO3)，探讨Na2SeO3对DON致猪脾脏淋巴氧化损伤的保护作用。
　　方法:
　　(1)通过分别添加不同浓度DON(0.0625μg/mL、0.125μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL)、Na2SeO3(0.25μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L)，体外原代培养猪脾脏淋巴细胞48h后，采用CCK-8法检测细胞活力，计算DON致猪脾脏淋巴细胞IC50及Na2SeO3作用于猪脾脏淋巴细胞最适营养浓度。
　　(2)正式试验分10组，分别为D1(DON824 ng/mL)，D2（DON412 ng/mL），D3(DON206 ng/mL), D4(DON103 ng/mL),S(Na2SeO32μmol/L), SD1(Na2SeO32μnmol/L+DON824 ng/mL),SD2(Na2SeO32μmol/L+ DON412 ng/mL),SD3(Na2SeO32μmol/L+DON206 ng/mL), SD4(Na2SeO32μmol/L+ DON103 ng/mL),对照组，于体外培养猪脾脏淋巴细胞6、12、24和48h后，分别检测细胞活力，细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性，细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性，细胞总抗氧化能力(T-AOC)和抑制羟自由基能力，细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和过氧化氢(H2O2)含量。
　　结果:
　　(1)培养48h后，与对照组相比，除0.0625μg/mL组外，其余各试验组均极显著降低猪脾脏淋巴细胞活力(P＜0.01)，并得出DON致猪脾脏淋巴细胞IC50为0.82+0.35μg/mL; Na2SeO3在0.25～4μmol/L能够显著提高脾脏淋巴细胞活力(P＜0.01)，其浓度提高到16μmol/L时明显降低细胞活力（P＜0.01），并得出Na2SeO3最适营养浓度为2μmol/L。
　　(2)单独添加DON作用于猪脾脏淋巴细胞，与对照组相比，除D4组个别指标外，其余各组细胞上清液LDH活性，MDA和H2O2含量均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;细胞活力，GSH含量，GPx、SOD、CAT活性，T-AOC和抑制羟自由基能力均明显下降（P＜0.05或P＜0.01）。
　　(3)单独添加Na2SeO3作用于猪脾脏淋巴细胞，与对照组相比，细胞活力、细胞GPx活性（12、24和48h）、T-AOC和抑制羟自由基能力均明显提高(P＜0.05或P＜0.01)，细胞H2O2含量（12和24 h）、MDA含量（24和48h）均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。
　　(4)联合添加DON和Na2SeO3作用于猪脾脏淋巴细胞，在整个试验期间，与单独添加DON组相比，联合添加DON和Na2SeO3组细胞活力、抗氧化酶(GPx、SOD、CAT)活性、T-AOC、细胞抑制羟自由基能力、GSH含量均提高，细胞内MDA和H2O2含量、培养上清液LDH活性均下降。其中，在24 h时，与单独添加DON组相比，联合添加DON和Na2SeO3组细胞活力(SD3和SD4组)、GSH含量、GPx活性(SD1组除外)、SOD活性（SD3和SD4组）、CAT活性（SD3和SD4组）、T-AOC及抑制羟自由基能力（SD3组除外）均明显提高（P＜0.05或P＜0.01），细胞内H2O2和MDA含量及上清液LDH活性均明显下降（P＜0.05或P＜0.01）。
　　结论:
　　DON暴露能够导致猪脾脏淋巴细胞抗氧化功能降低，导致细胞活力下降。0.25～4μmol/LNa2SeO3能够明显提高淋巴细胞活力，16μmol/L Na2SeO3则对猪脾脏淋巴细胞产生毒性作用。在本试验条件下，2μmol/L的Na2SeO3对DON诱导的猪脾脏淋巴细胞氧化损伤具有一定程度抑制作用，且在24 h时Na2SeO3对DON诱导猪脾脏淋巴细胞氧化损伤的抑制作用最佳。

目录

论文说明

声明

摘要

英文缩写词

第一章 文献综述

1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的免疫毒性及其机制研究进展

1．1 DON的理化性质

1．2 DON的污染情况

1．3 DON的免疫毒性作用

1．4 抗氧化剂对DON介导的氧化应激的预防作用

2 硒的抗氧化作用

2．1 微量元素硒概述

2．2 硒的抗氧化作用

2．3 硒对DON介导的细胞毒性的拮抗作用

3 研究目的意义

第二章 DON及Na2SeO3对体外培养猪脾脏淋巴细胞作用浓度的确定

1 试验材料

1．1 试验动物

1．2 主要仪器

1．3 主要试剂

2 试验方法

2．1 猪脾脏淋巴细胞悬液制备

2．2 DON致猪脾脏淋巴细胞IC50测定

2．3 Na2SeO3浓度试验

2．4 数据分析

3 试验结果

3．1 DON作用于体外原代培养猪脾脏淋巴细胞的毒性作用

3．2 Na2SeO3对体外原代培养猪脾脏淋巴细胞的影响

4 讨论

4．1 DON对体外原代培养猪脾脏淋巴细胞毒性作用

4．2 Na2SeO3对体外原代培养猪脾脏淋巴细胞活力的影响

5 小结

第三章 DON及Na2SeO3单独或联合作用对体外培养猪脾脏淋巴细胞抗氧化功能的影响

1 试验材料

1．1 试验动物

1．2 主要仪器

1．3 主要试剂

2 试验方法

2．1 猪脾脏淋巴细胞悬液的制备

2．2 试验分组及处理

2．3 检测指标及方法

2．4 数据分析

3 试验结果

3．1 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞活性的影响

3．2 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞培养上清液LDH活性的影响

3．3 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞MDA含量的影响

3．4 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞H2O2含量的影响

3．5 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞GPx活性的影响

3．6 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞SOD活性的影响

3．7 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞CAT活性的影响

3．8 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞GSH含量的影响

3．9 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞T-AOC的影响

3．10 DON及Na2SeO3单独或联合作用对猪脾脏淋巴细胞抑制羟自由基能力的影响

4 讨论

4．1 DON对猪脾脏淋巴细胞的氧化损伤作用

4．2 Na2SeO3对DON致猪脾脏淋巴细胞氧化损伤的抑制作用

5 小结

结论

参考文献

致谢