鸭瘟病毒诱导鸭胚成纤维细胞凋亡分子机制初探

摘要

鸭瘟病毒(DPV)能够引起鸭胚成纤维细胞(DEF)及淋巴细胞凋亡，围绕DPV诱导DEF凋亡通路及细胞周期等开展研究，获以下主要结果:
　　1.DPV诱导DEF细胞周期及细胞凋亡与病毒复制关系研究
　　(1)流式细胞仪检测DPV感染24h和36h的DEF细胞，结果显示G0/G1期细胞比例显著低照组，S期细胞比例显著高于对照组，导致细胞周期S期阻滞。(2)运用DAPI及流式细胞术检测DPV感染12h、24h、36h、48h和60h的DEF细胞显示，12h凋亡细胞较多，24h、36h及48h凋亡细胞减少;而RTqPCR及TCID50检测对应时间点的病毒含量表明，病毒含量在48h达到峰值，60h逐渐下降。这表明DPV复制对于诱导DEF凋亡不成正比。
　　2.宿主caspase家族蛋白在DPV诱导DEF细胞凋亡中的作用研究
　　DPV感染12h、24h、36h、48h和60h的DEF细胞，用RT-qPCR对caspase-3、caspase-7、caspase-8和caspase-9的mRNA的水平检测结果表明，DPV感染细胞的mRNA含量是对照组的2倍以上;对caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白进行活性检测结果表明，在24h、36h、48h的caspase-8的活性显著高于对照组，在36h、48h、60h的caspase-9活性显著高于对照组。caspase-3、caspase-9特异性抑制剂及caspase蛋白家族广谱性抑制剂能够抑制DPV诱导细胞凋亡，而caspase-8特异性抑制剂不能抑制DPV诱导细胞凋亡。
　　3.DPV通过线粒体、死亡受体和内质网通路诱导DEF细胞凋亡的研究
　　DPV感染12h、24h、36h、48h和60h的DEF细胞:(1)JC-1荧光探针检测线粒体膜电位，结果是感染细胞荧光多于对照;ROS检测12h、24h、36h和48h感染细胞的红色荧光值分别是对照的1.28、1.36、1.18和1.06倍，ROS清除剂预处理的细胞内ROS可被清除而使线粒体膜电位升高，抑制凋亡;(2)RT-qPCR检测结果表明，线粒体通路相关基因(Bak、Cyt-c、Smac、PARP、Apaf-1、Bid、Bcl-2、XIAP和AIF)，死亡受体通路相关基因（Fas、FasL、FADD和TRAIL），内质网通路相关基因(PERK、IRE1、Ca2+、CHOP、eiF2α和ATF4)的mRNA水平均是对照组的2倍以上。
　　综上，DPV感染DEF细胞引起细胞周期S期阻滞，并且能够通过线粒体、死亡受体和内质网通路诱导细胞凋亡。

目录

声明

摘要

部分缩写及符号说明

第一部分文献综述

1．1鸭瘟病毒

1．2细胞凋亡概述

1．3．1 α-疱疹病毒诱导细胞凋亡通路

1．3．2细胞凋亡对α-疱疹病毒复制及潜伏病毒激活感染的作用

1．4结论和展望

1．5选题目的与意义

第二部分试验研究

2．1材料、试剂和仪置

2．2实验方法

3 试验结果

3．1 DPV诱导DEF细胞周期S期阻滞

3．2 DPV诱导DEF凋亡

3．3 Caspases家族蛋白在DPV诱导DEF细胞凋亡中的作用

3．4 DPV诱导线粒体膜电位降低

3．5 ROS在DPV诱导DEF细胞凋亡中的作用

3．6线粒体通路、死亡受体通路及内质网通路相关基因变化

3．7讨论

全文总结

参考文献

附录

致谢

作者简介