线粒体DNA多态的变性高效液相色谱分析及其法医学应用研究

摘要

目的:建立新的mtDNA多态遗传标记的变性高效液相色谱检测技术,为法医学疑难检材的检测提供新的技术手段;利用变性高效液相色谱技术,寻找适合作为法医遗传标记的mtDNA编码区多态遗传标记,以期提高mtDNA在法医学检测中的应用价值.方法:应用primer3引物设计软件,对mtDNA控制区和编码区分别设计引物,用以进行PCR扩增.通过构建DNA池及样本间两两比较的方法,确定DHPLC发现异源双链的效能,从而建立mtDNA多态分析的DHPLC方法.用建立的方法,在成都汉族群体120名无关个体中,对mtDNA编码区各基因座进行多态性研究,获得等位基因及单倍型频率、变异度及标准误,并进行种属特异性、组织同一性以及陈旧骨骼、毛干等法医学疑难检材的DHPLC分析.结论:该课题成功的建立了对mtDNA控制区高识别力基因座进行快速法医学检测的DHPLC方法.实现了检测的快速、经济与高效,有望成为今后法医学mtDNA检测的重要技术;成功的建立了利用DHPLC技术分析mtDNA编码区多态的新方法,为寻找新的mtDNA多态基因座奠定了方法学基础.对mtDNA编码区1435bp长度范围内的DNA多态性的研究,共发现了53个单倍型,单倍型变异度达到0.8775,其中4个基因座具有较高的变异度,适合于法医学应用,为法医mtDNA分析提供了新的遗传标记.

目录

前言

第一部分线粒体多态基因座的DHPLC分析方法的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

参考文献

第二部分线粒体编码区新多态性的探索及其法医学应用研究

1材料与方法

2结果

2.1 DHPLC对mtDNA编码区基因座多态性分析方法的建立

2.2用所建立的方法一对mtDNA编码区基因座的多态性分析

2.3用所建立的方法二对mtDNA编码区Ⅰ基因座的多态性分析

2.4对所建立的方法二的验证分析

2.5 七个mtDNA编码区基因座在成都汉族群体中的单倍型分布

2.6 七个mtDNA编码区基因座的种属实验结果

2.7 七个mtDNA编码区基因座的组织同一性的DHPLC分析结果

2.8 陈旧骨骼和毛干的DHPLC分析结果

3讨论

4结论

参考文献

综述 变性高效液相色谱在核酸变异检测中的应用

参考文献

附录

研究生简历

致谢

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