曲安奈德对正常人视网膜色素上皮细胞毒性作用的体外研究

摘要

目的：研究曲安奈德(triamcinoloneacetonide，TA)对正常人视网膜色素上皮细胞(humanretinalpigmentalepithelium，HRPE)生长、增殖以及细胞周期的影响，同时观察TA作用后HRPE细胞形态和超微结构的改变，为TA玻璃体腔内注射的安全性提供实验性理论依据。 方法：1.体外培养正常HRPE细胞，观察细胞形态，角蛋白免疫细胞化学染色鉴定。 2.通过MTT比色法测定不同浓度(0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml)TA作用HRPE细胞1、3、5、7天的吸光值A，描绘细胞生长曲线，比较实验组和对照组A值的差别。流式细胞分析法(FlowCytometry，FCM)检测0.3mg/mlTA作用72小时后细胞周期的改变。 3.倒置相差显微镜和透射电子显微镜观察TA作用后HRPE细胞形态和超微结构的改变。 结果：1.正常HRPE细胞生长曲线近似“S”型，传代2天内为细胞潜伏适应期，然后进入对数生长期，约第7天进入生长平台期。 2.给药1、3、5天后各浓度TA对HRPE细胞生长均有明显抑制作用(P＜0.05)；给药7天后，除0.025mg/ml组外其余实验组也明显有抑制作用(P＜0.05)，并且具有浓度效应关系。 3.HRPE经0.3mg/mlTA处理72h后，细胞荧光流速分析显示G1期细胞增加了11.7％(P＜0.05)，S期细胞减少了10.6％(P＜0.05)。 4.光镜下实验组细胞密度明显稀疏，细胞形态不规则，有较多突起生成，胞浆内可见大量细胞空泡，并出现细胞碎片。电镜下实验组细胞核明显，染色质分布不均，胞质空化，甚至出现坏死细胞，染色质分布极不均匀，胞质内各种细胞器消失，细胞膜碎裂，可见TA对HRPE细胞有毒性作用。 结论：TA对体外培养正常HRPE细胞具有明显抑制增生的作用，且有浓度依赖性；通过对HRPE细胞周期各时相群体的影响，使S期细胞明显减少，可见TA能够抑制细胞的有丝分裂，从而抑制细胞的增生；本实验首次通过观察TA对HRPE细胞形态和超微结构的影响，发现TA作用后细胞形态明显破坏，甚至出现坏死细胞，说明0.3mg/mlTA对体外培养HRPE细胞存在明显的细胞毒性。

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缩略词表

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

实验的不足和展望

结 论

参考文献

文献综述 曲安奈德玻璃体腔内注射后毒副作用的相关研究

致 谢