转染γ-干扰素的口腔黏膜细胞片修复裸露硬腭的上颌骨生长发育研究

摘要

探讨干扰素-γ对腭瘢痕成纤维细胞的影响，培养口腔黏膜表皮干细胞，将干扰素-γ基因转染到口腔黏膜细胞内，构建转基因的组织工程化口腔黏膜，用其修复幼鼠的裸露硬腭，观察其在预防硬腭裸露后上颌骨继发畸形的效果。方法：以腭瘢痕成纤维细胞为研究对象，采用三维培养法，了解基因重组γ干扰素(IFN-γ)对瘢痕组织中成纤维细胞的生长增殖、组织收缩等生物学活动的影响。利用纤维结合素-胶原包被的培养瓶快速黏附法分离鼠口腔黏膜表皮干细胞，以鼠成纤维细胞条件培养基和无钙EMEM培养基配制表皮干细胞培养基进行培养。通过β1整合素和角蛋白15(K15)免疫组化染色对培养细胞进行鉴定。用携带γ-干扰素的真核表达载体转染口腔黏膜干细胞，检测外源质粒的整合和培养上清液中γ-干扰素浓度和对腭成纤维细胞增殖的影响。以羊膜为支架材料，负载转基因的口腔黏膜细胞，并将其修复裸露的硬腭，待生长发育停止时，测量和分析单纯以羊膜为敷料与以其为支架材料修复裸露硬腭的上颌骨的发育情况。通过HE染色、天狼猩红染色及电镜观察了解其组织学变化。结果：IFN-γ可以抑制腭部瘢痕成纤维细胞的生长增殖及三维培养的胶原纤维凝胶的收缩；鼠口腔黏膜表皮干细胞能够在低钙EMEM培养基中成功培养，检测β1整合素和角蛋白15(K15)免疫组化染色呈强阳性；羊膜及其负载的口腔黏膜干细胞修复裸露硬腭可以使Ⅰ/Ⅲ型胶原的比例及硬腭的非对称率降低。结论：体外IFN-γ对模拟的腭瘢痕具有明显的负性调节作用。用鼠成纤维细胞条件培养基和无钙EMEM培养基配制的表皮干细胞培养基可以初步实现对鼠口腔黏膜表皮干细胞体外分离与培养。γ-干扰素真核表达载体可成功地转染大鼠口腔黏膜干细胞，并分泌有活性的γ-干扰素。羊膜及其负载的口腔黏膜细胞修复裸露的硬腭对于防治硬腭裸露后的继发畸形有积极作用，负载口腔黏膜细胞者明显好于羊膜，转染γ-干扰素者约优于未转染者，但后两者间统计学上未见有差异。 综上所述，羊膜及其负载的口腔黏膜细胞修复裸露的硬腭对于防治硬腭裸露后的上颌骨继发畸形是有非常有益的，γ-干扰素可以减轻腭瘢痕形成的严重程度，但在防治硬腭裸露后上颌骨继发畸形的应用方式上还有待于进一步研究。

目录

声明和学位论文版权使用授权书

前 言

第一部分：干扰素-γ对腭部瘢痕成纤维细胞的影响研究

第二部分：口腔黏膜表皮干细胞的分离培养与鉴定

第三部分：γ-干扰素基因转染口腔黏膜干细胞及对腭瘢痕纤维细胞增殖影响的研究

第四部分：转染γ-干扰素的大腔黏膜细胞片修复裸露硬腭的组织学研究

1材料与方法

2结果

3讨论

附图1

附图2

附图3

附图4

第五部分：转染γ-干扰素的口腔黏膜细胞片修复裸露硬腭的上颌骨生长发育研究

全文总结

参考文献

综述一 羊膜在生物医学中的应用研究

综述二 TGF-β与软组织创面修复的研究进展

参考文献

个人简历

致 谢