整合子-基因盒系统介导和传播耐药性的研究

摘要

目的: 测大肠埃希菌临床分离株的耐药性，了解大肠埃希菌中整合子的存在频率、类型，以及基因盒的种类和排列，观察细菌携带基因盒与耐药表型的关系，以及整合子在不同基因型菌株中的分布，探讨整合子-基因盒系统介导和传播细菌耐药性的分子机制。 方法: 用全自动细菌分析仪，对94株大肠埃希菌临床分离株进行确认、产ESBLs判读和20种抗生素敏感性测定，纸片扩散法对另外4种抗生素进行敏感性测定；应用PCR方法，扩增总DNA和质粒DNA上Ⅰ类整合子、Ⅱ类和Ⅲ类整合酶；对大小相同的Ⅰ类整合子进行酶切分析；对纯化后的Ⅰ类整合子进行DNA测序，将DNA序列在GeneBank中搜索，确定Ⅰ类整合子可变区基因盒的种类和排列；利用脉冲场电泳(PFGE)对大肠埃希菌进行分子分型。 结果: 菌对15种抗生素的耐药率超过50％，耐药率高的抗生素包括氨苄青霉素(94％)、氧哌嗪青霉素(87％)等，45株(47.9％)细菌产ESBLs，90株(95.7％)细菌为多重耐药菌(耐受3种以上抗生素)。在52株(55.3％)细菌的总DNA上检测到Ⅰ类整合子，41株(43.6％)细菌的质粒DNA上检测到Ⅰ类整合子，推测14株(14.9％)细菌的染色体DNA上存在Ⅰ类整合子，其中3株细菌质粒DNA和染色体DNA上各有1个整合子，5株(5.3％)细菌含两个Ⅰ类整合子，Ⅰ类整合子的大小为600bp～3000bp，52株细菌各含1～2个Ⅰ类整合子，未检测到Ⅱ、Ⅲ类整合酶。大小相同的Ⅰ类整合子有相同的酶切图谱，据此认为它们有相同序列。整合子中最常见的基因盒为dfr17(甲氧苄啶耐药基因)、aadA5(链霉素、壮观霉素耐药基因)，最主要的基因盒排列为dfr17-aadA5。携带甲氧苄啶耐药基因盒的绝大多数菌株对复方新诺明耐受，携带链霉素、壮观霉素耐药基因盒的大多数菌株对链霉素不敏感。82株大肠埃希菌能被PFGE分为不同的基因型，在不同基因型菌株中发现了相同的整合子。 结论: 肠埃希菌临床分离株的耐药性强，Ⅰ类整合子在大肠埃希菌中广泛存在，耐药基因盒与甲氧苄啶、早期使用的氨基糖苷等传统抗生素有着密切的联系，菌株携带基因盒和耐药表型之间有较好的对应关系，基因盒介导了细菌耐药性，基因分型结果提示整合子在细菌种内的水平传播。通过本研究，获得了整合子、基因盒在大肠埃希菌中的分子流行病学资料，进一步探讨了整合予介导和传播细菌耐药性的分子机制，为制定抗生素的相关政策、合理使用抗生素和控制细菌耐性发展提供了理论基础。

目录

前言

第一部分大肠埃希菌临床分离株耐药性分析

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分大肠埃希菌中整合子和基因盒的分析

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分脉冲场电泳分子分型

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

综述：整合子-基因盒系统研究进展

1细菌耐药的生化机制

2整合子的一般特性

3Ⅰ类整合子的结构

4整合子的分类

5基因盒结构

6基因盒的移动

7基因盒的表达

8融合基因盒

9整合子的流行病学

10整合子的检测

11Ⅲ类整合子

12超整合子

13基因盒的来源

14整合子参与细菌进化

15结语

参考文献

致谢

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