前言
第一章低温胁迫对播娘蒿和紫花苜蓿生理的影响
1试验材料
1.1材料和处理
1.2仪器设备
1.3试剂
2试验方法
2.1叶片SOD酶活性测定
2.2叶片脯氨酸含量测定
2.3叶片电导率的测定
3结果
3.1不同光照时间对氮蓝四唑显色反应的影响
3.2低温胁迫对叶片SOD酶活性影响
3.3低温胁迫对叶片脯氨酸含量的影响
3.4低温胁迫对紫花苜蓿叶片电导率的影响
4讨论
4.1低温胁迫与SOD活性的关系
4.2低温胁迫与脯氨酸含量的关系
4.3冰冻胁迫与质膜伤害的关系
第二章播娘蒿CBF基因EST序列克隆和3’末端序列扩增
1试验材料
1.1实验植株
1.2实验用试剂盒、工具酶
1.3试剂
1.4引物的合成
2试验方法
2.1播娘蒿总RNA提取
2.2播娘蒿CBF基因EST序列的同源克隆
2.3播娘蒿CBF基因3'RACE扩增
3结果与分析
3.1播娘蒿总RNA的提取
3.2多个物种CBF蛋白氨基酸序列同源性比对结果
3.3播娘蒿CBF基因EST的克隆结果
3.4播娘蒿CBF基因3'RACE结果及巢式引物验证
4讨论
4.1播娘蒿CBF基因EST序列克隆
4.2 cDNA 3’末端快速扩增(3'RACE)的使用
第三章播娘蒿CBF基因5’末端扩增
1试验材料
1.1模板
1.2引物设计与合成
2试验方法
2.1环化法
2.2末端脱氧核糖核酸转移酶法
2.3 CLONTECH的5'RACE反转录酶法
3结果与分析
3.1环化法5’RACE
3.2末端脱氧核糖核酸转移酶(TDT酶)法5'RACE
3.3 CLONTECH的5'RACE反转录酶法
4讨论
4.1 5'RACE方法的比较
4.2 5'RACE技术的优化改进
附图
第四章播娘蒿CBF基因序列结构分析和功能预测
1分析方法
1.1核苷酸序列分析
1.2蛋白质序列分析
2结果分析
2.1核酸序列分析结果
2.2蛋白质序列分析
3讨论
3.1生物信息学分析方法的产生和利用
3.2播娘蒿CBF基因的结构和功能预测
3.3播娘蒿CBF基因与拟南芥CBF基因的不同
3.4播娘蒿CBF基因5’端非翻译区在抗寒能力中可能存在的作用
第五章播娘蒿CBF基因的原核表达和纯化
1.材料
1.1质粒和菌株
1.2酶和主要试剂
1.3引物合成
2.方法
2.1播娘蒿CBF基因完整ORF框的引物设计
2.2播娘蒿CBF基因完整ORF框的PCR扩增
2.3重组表达载体的构建
2.4 pET32a-CBF在大肠杆菌中的表达筛选
2.5重组菌菌体裂解物的凝胶电泳
2.6播娘蒿CBF蛋白的分离纯化
3.结果和分析
3.1播娘蒿CBF目的基因片段的扩增和表达载体的构建
3.2重组载体pET32a-CBF的表达和SDS-PAGE电泳
3.3原核表达播娘蒿CBF融合蛋白的分离纯化
4.讨论
4.1播娘蒿CBF蛋白表达诱导时间和IPTG浓度的优化
4.2 pET表达载体的选择与播娘蒿CBF蛋白的展望
结论
致谢
综述一：植物抗寒研究进展
1植物的低温损害机理
1.1生物膜系统
1.2酶系统与植物抗寒性
2植物低温胁迫下的生理响应及低温诱导基因的研究方法
2.1低温胁迫下植物生理响应的研究方法
2.2低温诱导基因表达的研究方法
3冷驯化对植物抗寒性的生理影响
3.1冷驯化提高了膜的抗冷性
3.2冷驯化提高了植物的抗氧化能力
3.3冷驯化提高了细胞内可溶物的积累
3.4冷驯化提高植物低温诱导基因表达及其产物积累
4目前已知的提高植物抗寒性的措施
4.1低温驯化
4.2 Ca和CaM
4.3化学物质
4.4转入与膜稳定性和流动性相关的基因
4.5转入与细胞活性相关的蛋白基因
4.6转入与抗渗透胁迫相关的基因
4.7转入抗冻蛋白基因
4.8清除活性氧中间产物
5问题与前景展望
综述二：CBF基因研究进展
1 CBF基因的发现
2 CBF转录激活因子的结构与特性
3 CBF转录激活因子的表达
4 CBF转录激活因子的生理生化功能
5 CBF转录激活因子在提高植物耐逆性中的作用
6 CBF的同源性基因
7展望
参考文献
在校期间学习情况
声 明
