播娘蒿DREB1/CBF基因的克隆和表达及其转基因拟南芥植株的筛选

摘要

冷胁迫是限制农作物产量、质量、收获后保存期的重要的环境胁迫之一。全球每年因为低温造成的经济损失达到上千亿美元，如何减少低温所造成的经济损失已成为世界性的问题。 许多温带植物，包括模式植物拟南芥，都显示出响应低温非冻温的状况下出现抗寒性的提高的现象，这种现象被称为冷驯化。在长期的植物逆境胁迫响应研究中发现，CBF途径在低温响应中占主要地位。其中的主要元件--胞嘧啶重复/脱水响应元件结合因子(C-repeat/dehydration responsive binding factor)，由DREB1/CBF基因家族编码。CBF基因在高等植物中广泛存在，DREB1/CBF转录因子在冷胁迫响应中起

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前言

第一章DsCBF1基因的5'非翻译区克隆以及DsCBF2基因EST序列的克隆

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1 5'RACE引物的各项参数

2.2 5'RACE扩增结果

2.3 CBF1全长拼接

2.4DsCBF2 EST扩增的结果

2.5 DsCBF2相似性搜索

2.6 CBF基因核酸序列分析

2.7多个物种CBF蛋白核酸序列同源性比对结果

2.8 CBF家族系统发育分析

3 讨论

3.1提高5'RACE的成功率

3.2播娘蒿DsCBF1和DsCBF2

3.3蛋白比对分析

3.4系统发育分析

第二章播娘蒿DsCBF基因家族的差异表达研究

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1 18S rRNA的cDNA片段的克隆

2.2引物参数

2.3荧光定量引物的验证

2.4荧光定量的结果

3讨论

3.1冷胁迫温度和时间的设定

3.2荧光定量PCR研究播娘蒿CBF基因差异表达

3.3荧光定量PCR的系统误差

3.4 CBF基因在冷胁迫条件下的差异表达

第三章CBF基因转基因拟南芥研究

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1引物参数

2.2播娘蒿CBF1基因ORF的克隆

2.3构建重组表达载体转化农杆菌

2.4转化野生型拟南芥

2.5抗生素筛选

3讨论

3.1农杆菌培养

3.2花序转染拟南芥的方法及其原理

3.3花序转染方法的优缺点

3.4花序转染的频率

3.5转染后的初步鉴定

结论

致谢

综述

参考文献

在校期间学习情况