高温碱性蛋白酶菌株的选育、酶学性质及脱毛条件的研究

摘要

本文以芽孢杆菌SD-142菌为出发菌株，对原生质体制备及再生的各种影响因素进行了研究。SD-142菌的原生质体形成率及再生率分别达到了86.8％和31.3％。　　在原生质体形成及再生的最佳条件下制备SD-142菌株原生质体，并对其进行了复合诱变处理，从大量突变株中筛选出一株稳定，具有较高产量的碱性蛋白酶产生菌CH-17-9，其酶活由出发菌株的516u/mL提高到2759.4u/mL。　　菌株CH-17-9分泌的高温碱性蛋白酶最适反应温度60℃，最适酶作用pH9.5。在pH6.5～11.0范围里，菌株表现出高的，比较稳定的蛋白酶活性。粗酶液在40℃水浴中保温24h，酶活没有改变；60℃水浴保温30min，酶活保持53.4％；在CaCl2(0.01mol/L)和glycine(1mol/L)存在下，酶的热稳定性均有所提高；若在glycine存在下60℃水浴保温1h，剩余酶活60.8％，延长了酶的半衰期。　　研究表明CH-17-9分泌的高温碱性蛋白酶在洗涤业中可能有应用潜力。　　本文采用菌株CH-17-9发酵液原液在28～30℃下进行脱毛。结果显示：在pH8.5～9.5时，用150u/g酶浓度堆置24h；或pH9.5～10.5时，有温有浴酶，酶浓度250u/g，180r/min，12h脱毛效果最佳。　　研究发现，对有温有浴酶脱毛来说，由于酶在较高温度下并伴有机械挤压和摩擦，所以酶向皮内渗透快，脱毛迅速，但工艺控制困难，容易造成松面、毛穿孔或留毛的质量缺陷。相比较而言，堆置法脱毛的操作容易控制，松面、毛穿孔等质量缺陷也大大减少，但此方法需要较长的时间才能将毛脱下，气味难闻。同时，实验证明CH-17-9菌株能耐盐、碱，所产生的高温碱性蛋白酶具有较好的稳定性和脱毛效果，并且有较低的胶原酶活性，控制好条件不会产生烂皮现象，显示了其适用于皮革工业的性能与前景。

目录

论文说明：表格目录、图形目录

第一章原生质体形成及再生的最佳条件

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果与讨论

2.1 SD-142菌的生长曲线

2.2青霉素对SD-142菌原生质体形成的及再生的影响

2.3 SD-142菌对甘氨酸的敏感性

2.4青霉素与甘氨酸对SD-142菌原生质体形成的影响

2.5溶菌酶作用的最佳条件

2.6再生培养基的选择

2.7高渗透压培养基稳定剂对原生质体再生率的影响

2.8 SD-142菌原生质体形成和再生最佳条件的综合实验

2.9原生质体形成和再生的微显观察

3讨论

参考文献

第二章诱变株的选育、酶学性质和脱毛条件的研究

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1蛋白酶活力测定标准曲线的制作

2.2原生质体及菌体的紫外诱变处理

2.3 LH-22菌的UV-NTG复合诱变

2.4 CH-17菌的热孢子处理选育

2.5菌株的稳定性实验

2.6酶学性质

2.7脱毛实验

3讨论

3.1原生质体对诱变剂的敏感性

3.2 UV-NTG复合诱变的效果与特点

3.3酶性质研究

3.4脱毛研究

参考文献

结论

微生物碱性蛋白酶的研究进展

1 蛋白酶概况

2 碱性蛋白酶的背景

3 碱性蛋白酶的来源

4 蛋白酶的作用机制

5 碱性蛋白酶的性质

6 碱性蛋白酶的应用

7 碱性蛋白酶的基因结构及功能

8 高产菌种的选育

9 碱性蛋白酶研究的技术进展

10 碱性蛋白酶基因工程改进

11 结语

参考文献

致谢

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