系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞亚群CD95和CD137信号传导途径异常与淋巴细胞凋亡紊乱的研究

摘要

目的分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的凋亡状态，CD95-CD95L信号传导通路和CDl37-CDl37L信号传导通路在介导T淋巴细胞亚群凋亡紊乱中的作用；抗核小体抗体与SLE患者淋巴细胞凋亡调节紊乱的关系，探讨SLE患者T淋巴细胞亚群凋亡紊乱状态和凋亡信号传导途径的关系，为发现SLE患者T细胞凋亡信号传导途径中的异常关键靶位奠定基础。 方法分析39例SLE患者(包括稳定期患者22例，活动期患者17例)，13例健康对照者外周血中淋巴细胞凋亡紊乱状态。采用流式细胞分析仪结合Annexin V-FITC／PI双染色的方法测定SLE患者和健康对照者外周血淋巴细胞的凋亡百分率和坏死百分率。采用流式细胞分析仪并结合荧光标记单克隆抗体检测SLE患者和健康对照者外周血T淋巴细胞亚群表面CD95、CD95L和CDl37分子的表达。结合FITC标记的FAM-DEVD，检测外周血T淋巴细胞亚群细胞质中活化caspase-3蛋白酶的表达。酶联免疫吸附分析(EL,ISA)技术测定SLE患者组血清中sCD95L、抗核小体抗体的浓度。利用速率散射比浊仪测定SLE患者血清中补体C3的浓度。应用SPSS11.0统计软件分析数据，结果以均数±标准差(X±s)或中位数(四分位数间距)[median(range)]表示。依据数据的分布特征，正态分布的数据采用t检验进行两组间比较，或one-wayANOVA分析进行多组间比较，q检验法进行组间两两比较；非正态分布数据采用Wilcoxon符号秩和检验进行配对资料的两样本比较分析，Kruskal-Wallis检验进行多组间比较分析，Nemenyi法进行组间两两比较。并进行Spearman秩相关分析。 结果①SLE患者和健康对照者外周血T细胞亚群表达分析显示：与健康对照组比较，稳定期患者组CD3<'+>T淋巴细胞和CD3<'+>CD8<'+>T淋巴细胞比例略有下降但差异无统计学意义(P>0.05)，CD3<'+>CD4<'+>T淋巴细胞比例和CD4<'+>T细胞／CD8<'+>T细胞比值下降(P<0.05)；而活动期患者组CD3<'+>T淋巴细胞、CD4<'+>T淋巴细胞和CD8<'+>T淋巴细胞比例显著下降(P<0.05)，CD4<'+>T细胞／CD8<'+>T细胞比值降低(P<0.05)。活动期患者组和稳定期患者组比较，CD3<'+>T淋巴细胞、CD3<'+>CD4<'+>T淋巴细胞和CD3<'+>CD8<'+>T淋巴细胞比例以及CD4<'+>T细胞／CD8<'+>T细胞比值无明显差异(P>0.05)。②SLE患者和健康对照者淋巴细胞凋亡百分率和坏死百分率分析显示：活动期和稳定期SLE患者组外周血淋巴细胞凋亡细胞百分率和坏死细胞百分率显著高于健康对照组(P<0.05)。活动期SLE患者组凋亡细胞百分率略高于稳定期SLE患者组(但P>0.05)，坏死细胞百分率显著高于稳定期患者组(P<0.05)。③SLE患者组和健康对照组T细胞凋亡信号分子CD95的表达分析显示：与健康对照组相比较，活动期及稳定期SLE患者组CD4<'+>T细胞表面CD95分子的表达率均显著增加(P<0.05)；CD8<'+>T细胞表面CD95分子的表达率略有增加但差异无统计学意义(P>0.05)。活动期SLE患者组CD4<'+>T细胞表面CD95分子的表达率较稳定期SLE患者组略有增加但差异无统计学意义(P>0.05)；CD8<'+>T细胞表面CD95分子的表达率无明显改变(P>0.05)。SLE患者组CD4<'+>T细胞表面CD95分子的表达率，均显著高于CD8<'+>T细胞表面CD95分子的表达率(P<0.05)。对CD4<'+>T细胞与CD8<'+>T细胞表面CD95分子表达率的比值分析表明，3组间相比较无统计学意义(P>0.05)。④对CD95分子的配体CD95L(CD95 ligand)的研究结果显示：活动期和稳定期SLE患者组T细胞亚群表面CD95L分子的表达率均显著高于健康对照组(P<0.05)。活动期和稳定期SLE患者组相比较，T细胞亚群表面CD95L分子的表达率无显著性差异(P>0.05)。无论是SLE患者组还是健康对照组，对CD4<'+>T细胞与CD8<'+>T细胞表面CD95L分子表达率的比值分析表明，3组间差异均无统计学意义(P>0.05)。⑤进一步对CD95L的可溶性形式sCD95L研究发现：SLE患者组和健康对照组比较，血清sCD95L浓度无显著性差异(P>0.05)。⑥对具有增殖和凋亡双重效应的共刺激分子CDl37分析结果显示：未经PHA刺激时，T淋巴细胞亚群表面CDl37分子的表达率在SLE患者组和健康对照组间无显著性差异(P>0.05)；经PHA刺激48小时后，活动期和稳定期SLE患者组CD4<'+>T细胞表面CDl37分子的表达率显著高于健康对照组(P<0.05)；活动期SLE患者组CD8<'+>T细胞表面CDl37分子的表达率高于健康对照组(P<0.05)，而稳定期患者组CD8<'+>T细胞表面CDl37分子的表达率略高于健康对照组但差异无统计学意义(P>0.05)。活动期患者组和稳定期患者组相比较，T细胞亚群表面CDl37分子的表达率无显著性差异(P>0.05)。对CD4<'+>T细胞与CD8<'+>T细胞表面CDl37分子表达率的比值分析表明，活动期SLE患者组高于健康对照组(P<0.05)。⑦对SLE患者自身抗体的主要成分——抗核小体抗体浓度测定显示：活动期SLE患者组血清中抗核小体抗体浓度，显著高于稳定期SLE患者组和健康对照组(P<0.05)。而稳定期SLE患者组与健康对照组相比，血清中抗核小体抗体浓度水平无明显改变(P>0.05)。⑧活动期SLE患者组血清补体C3浓度低于稳定期SLE患者组(P<0.05)。 ⑨相关性分析结果显示：SLE患者凋亡细胞百分率与抗核小体抗体浓度呈正相关关系(r<,s>=0.350，P=0.03 1)，血清C3浓度与凋亡细胞百分率呈负相关关系(r<,s>=-0.593，P=-0.001)，与抗核小体抗体浓度呈负相关关系(r<,s>=-0.557，P=0.001)。 结论 ①SLE患者组外周血淋巴细胞凋亡加速，以CD4<'+>T细胞凋亡为主。②CD95-CD95L信号传导通路在介导SLE患者T细胞亚群凋亡中的作用不尽相同：CD95-CD95L信号传导途径在介导SLE患者CD4<'+>T细胞的凋亡中发挥重要作用，而CD95介导的信号传导途径不是引起SLE患者CD8<'+>T细胞凋亡的主要途径，可能存在其他的信号传导途径诱导CD8<'+>T细胞凋亡。③CDl37-CDl37L介导的信号传导通路在SLE患者T淋巴细胞凋亡紊乱中并未发挥作用。④caspase-3蛋白酶是凋亡过程中的关键效应蛋白酶，SLE患者T细胞亚群中存在caspase-3蛋白酶的活化，而且以CD4<'+>T细胞尤为显著，CD95-CD95L活化caspase-3的信号传导通路是导致CD4<'+>T细胞凋亡的主要通路。CD8<'+>T细胞中活化caspase-3蛋白酶的表达量增高，但CD8<'+>T细胞表面CD95分子的表达率与细胞质中活化caspase-3蛋白酶的表达率的变化不一致，提示CD8<'+>T细胞内caspase-3蛋白酶的活化效应不是主要由CD95-CD95L信号通路激活。⑤SLE患者淋巴细胞凋亡百分率增加，凋亡细胞释放凋亡小体增加，凋亡小体在体内滞留，可释放大量核小体刺激机体产生大量抗核小体抗体，是进一步造成机体自身免疫病理损伤的重要原因之一。

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讨论

结论

参考文献

文献综述 4-1BB/4-1BBL共刺激信号通路在T淋巴细胞活化和自身免疫性疾病中的作用

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