卡铂缓释微球瘤内注射对裸鼠A细胞移植瘤疗效的实验研究

摘要

目的：1．制备卡铂-PLGA缓释微球，考察其外观形态、粒径分布、载药量、包封率和体外释药等性质。2．体外评价卡铂-PLGA微球对A<,549>细胞的抑制作用。3．研究卡铂-PLGA微球瘤内注射对裸鼠A<,549>移植瘤的抑制作用及对肿瘤细胞凋亡、增殖和耐药性状的影响。 方法：1．通过复乳法制备卡铂-PLGA缓释微球，用扫描电镜及激光粒度分布仪观察微球形态并测定其粒径分布；考察微球载药量、包封率指标；以PBS液为体外释药介质，采用原子吸收光谱(AAS)初步研究卡铂缓释微球体外释药特性。2．将卡铂-PLGA微球加入培养液中，与A<,549>细胞共同培养，用四氮唑盐还原法(MTT)评价卡铂-PLGA微球对A<,549>细胞生长的抑制能力。3．采用裸鼠A<,549>移植瘤模型，将裸鼠随机分为5组：生理盐水瘤内注射组(A组)、空白微球瘤内注射组(B组)、卡铂溶液腹腔注射组(C组)、卡铂溶液瘤内注射组(D组)、卡铂-PLGA微球瘤内注射组(E组)，每组12只，于干预措施后测量肿瘤的大小。各组12只裸鼠又随机分为3组，每组4只，在实验的1、3、5周末分3次处死，留取肿瘤、血浆、肝、肾、骨组织，用原子吸收光谱检测组织中卡铂的含量，对肿瘤标本作TUNEL标记检测肿瘤细胞的凋亡指数，同时行增殖细胞核抗原(PCNA)、P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶pi(GST-π)免疫组化检查，并行图像的定量分析。 结果： 1．采用复乳法制备的卡铂-PLGA缓释微球，表面光滑圆整，微球大小较均匀，颗粒规则无粘连，粒径分布范围较窄，平均粒径77.030μm，微球的径距为0.647μm；冷冻干燥后，微球再分散性良好，无聚集成簇现象；微球的平均载药量为11.72±0.56％，平均包封率为58.44±1.77％；载药微球在18天内的累积释药率为91.45％，释药过程较为平稳，其体外释药较好地符合Higuchi方程：Q(t)=24.7871×t<'1/2>-9.9260，R=0.9958。 2．卡铂-PLGA微球在体外对A<,549>细胞有抑制作用，50％生长抑制浓度(IC<,50>)为136.03ug/ml，卡铂-PLGA微球的直线回归方程是：Y=0.3304X+5.0553(n=6，R=0.9639)，空白微球对A<,549>细胞无明显的抑制作用。 3．裸鼠A<,549>移植瘤体积测量，A、B组体积增加最快，5周末体积>7000mm<'3>，两组之间P>0.05；C、D、E三组中，E组的效果优于D组，D组的效果又优于C组(P<0.05)。A、B、C组的肿瘤标本未检测到铂；D组1周末的肿瘤标本卡铂含量为0.83±0.24 ug/g，3周、5周末的肿瘤标本未检测到铂；1、3、5周末E组肿瘤标本的卡铂含量分别为403.95±99.71ug/g、68.51±12.41ug/g、1.40±0.79ug/g，与其它各组比较，P<0.05；各组的血浆、肝、肾、骨标本中未检测到铂。肿瘤细胞凋亡检测：A、B组在1周、3周末未见明显的凋亡，5周末肿瘤细胞核偶见阳性标记，A、B组之间无明显差异；C、D、E三组的凋亡指数(AI)随时间延长呈下降趋势，1周、3周末，C、D、E组的AI明显高于对照组A组，P<0.05；5周末D、E组高于A组，P<0.05；E组各时间点的AI均高于其它各组相应时间点的AI，P<0.05。肿瘤细胞PCNA表达：实验初期A组和B组的PCNA表达很高，1周末增殖指数(PI)分别为71％、73.8％，然后PI值随时间逐渐降低，1周末与3周末比较，P<0.05；两组间的PI比较，P>0.05；C组、D组的PI在1周末分别为52.8％、45.4％，低于A组，P<0.05；3周、5周末的PI与A组比较，P>0.05；C、D组间比较，P>0.05。E组的PCNA表达在5组中是最低的，1、3、5周末P1分别为24.8％、27％、38％，有随时间逐渐上升的趋势，但与其它各组各时点的PI比较，P<0.05。肿瘤细胞P-gp表达：A、B、C、D四组的肿瘤细胞在1、3、5周末的P-gp阳性染色积分光密度(IOD)变化不大，各组比较，P>0.05；E组肿瘤细胞的P-gp阳性染色IOD在3周和5周末有所增加，但组内比较，P>0.05；与对照组各时间点比较，P>0.05。肿瘤细胞GST-π表达：A、B、C组肿瘤细胞的GST-π阳性染色IOD无明显变化，各组、各时间点比较，P>0.05；D组的IOD值较A组有所增加，5周末与对照组比较P<0.05；E组的IOD较前面各组都有较为明显的增加，随时间延长增加明显，1、3周末与A、B、C组比较，P>0.05；5周末，P<0.05；D、E两组间比较，P>0.05。 结论：1．采用复乳法制备的卡铂-PLGA微球具有较好好的载药和缓释能力和良好的药剂学特性；2．对体外培养的A<,549>细胞具有较好的抑制能力，并且存在量效关系；3．瘤内注射卡铂-PLGA微球对裸鼠A<,549>皮下移植瘤具有良好的抑制作用，能显著促进肿瘤细胞的凋亡，抑制细胞增殖，效果优于卡铂溶液瘤内注射和腹腔给药；4．卡铂-PLGA微球瘤内化疗后对剩余肿瘤细胞的耐药性状可能会产生一定影响，肿瘤细胞对卡铂的解毒能力有所增强。

目录

声明

摘要

前 言

第一部分卡铂-PLGA缓释微球的制备及性质研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分卡铂-PLGA微球对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三部分卡铂-PLGA缓释微球治疗裸鼠A549移植瘤的实验研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

附图

结 论

综述 抗肿瘤药物缓释微球的研究进展

致 谢