乳腺癌中脂肪酸合成酶相关信号转导分子的研究

摘要

目的： 1．用RFDD-PCR、RT-PCR、免疫组织化学染色和Western blot等方法，检测FAS以及与FAS过度表达可能相关的ErbB家族、PI-3K家族和FABP家族不同成员在癌旁正常组织、乳腺纤维腺瘤和乳腺浸润性导管癌的表达差异。 2．分析各成员与FAS的相互关系，筛选出与FAS过度表达相关的信号分子。 3．探讨FAS在乳腺浸润性导管癌发生发展中可能的作用机制。 4．为探询乳腺浸润性导管癌的分子标志和治疗的靶基因提供理论依据。 方法： 1．在Qbio-gene Inc．MP Biomedicals，Inc．公司提供的数据库(http://www．qbio-gene．com/displayfit/)中，逐一查找FAS、ErbBs、PI-3Ks和FABPs基因家族所在的表达窗以及基因片段的长度。用RFDD-PCR的方法在相应表达窗对目的片段进行PCR扩增。 2．应用高电压垂直电泳系统，以7％尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离表达基因片段，Yyphoon9200成像系统和图像分析软件ImageQuant TL，Image Tool，Fragment．Analysis软件对凝胶图象进行分析，比较目的基因片段在乳腺浸润性导管癌、淋巴结转移组织和癌旁正常组织表达的差异。 3．因未能在数据库中获得FAS、FABPs基因的相关信息，故用半定量RT-PCR方法检测这些基因的mRNA在乳腺浸润性导管癌和癌旁正常组织的表达差异。同时，用RT-PCR进一步检测ErbBs和PI-3Ks各成员在乳腺浸润性导管癌和癌旁正常组织的表达差异，并检测ErbBs、PI-3Ks与FAS表达的相关性，筛选出其表达与FAS表达相关的基因。 4.用免疫组织化学染色方法检测FAS及其相关蛋白ErbB-1、ErbB-2、E-FABP、H-FABP、L-FABP和VEGF等在乳腺纤维腺瘤和乳腺浸性导管癌组织的时空表达变化。 5.用Western blot进行定量分析，比较以上目的蛋白在不同乳腺组织以及乳腺浸润性导管癌不同组织学级数的表达量的变化。 6.用T检验检测组间的表达差异。根据免疫组织化学结果，用x<'2>检验检测FAS与ErbB-1、ErbB-2、E-FABP、L-FABP和VEGF蛋白表达的相关性。用Pearson相关性系数检验两组变量间的相关性。P<0.05被认为有统计学意义。 结果： 1.ErbB-1、ErbB-2、ErbB-3 mRNA在乳腺浸润性导管癌的表达较癌旁正常组织明显升高(P<0.05)。ErbB-4在两组的表达无显著性差异(P>05)。ErbB-1和ErbB-2在FAS阳性组的表达较阴性组明显升高(P<0.05)。ErbB-1和ErbB-2 mRNA的表达与FAS有明显相关性(P<0.05)。 2.PIK3CA、PIK3CB、PIK3C2A、PIK3C2B、PIK3CG mRNA在乳腺浸润性导管癌的表达较癌旁正常组织明显上调(P<0.05)。PIK3R1、PIK3R3、PIK3R4在导管癌组织表达明显下调(P<0.05)。PIK3CA、PIK3CB的表达在FAS阳性组的表达较阴性组明显上调(P<0.05)。PIK3CA、PIK3CB与FAS mRNA的表达有明显相关性(P<0.05)。 3.A-FABP、B-FABP、I-FABP、G-FABP在乳腺浸润性导管癌的表达较乳腺纤维腺瘤无显著性差异(P>0.05)。E-FABP、H-FABP和L-FABP在导管癌较纤维腺瘤表达明显上调(P<05)。 4.FAS、E-FABP、H-FABP、L-FABP与乳腺浸润性导管癌组织学级数相关(P<0.05)，但是与患者年龄、淋巴结转移、雌孕激素受体等其它临床病理学特征无关(P>0.05)。 5.FAS、E-FABP和H-FABP的表达在Ⅲ级导管癌的表达较Ⅰ、Ⅱ级明显下调(P<0.05)。E-FABP、H-FABP与FAS的表达具明显相关性(P<0.05)。 6.L-FABP、VEGF在Ⅲ级导管癌的表达较Ⅰ、Ⅱ级明显上调(P<0.05)。L-FABP、VEGF的表达有明显相关性(P<0.05)，但它们的表达与FAS无关(P>0.05)。 结论： 1.FAS、ErbB-1、ErbB-2和ErbB-3的过度表达可能与乳腺浸润性导管癌的发生、发展有关。ErbB-1、ErbB-2可能作为FAS的上游分子，调节FAS的表达。 2.PIK3CA、PIK3CB、PIK3C2A、PIK3C2B、PIK3CG的过度扩增以及PIK3R1、PIK3R3、PIK3R4表达的下调可能与乳腺浸润性导管癌细胞的增殖、存活、恶化、黏附和转移有关。 3.PIK3CA、PIK3CB与ErbB-1、ErbB-2和FAS的密切关系提示，活化的PIK3CA、PIK3CB可能通过与激活的受体ErbB-1、ErbB-2结合以及PI-3K底物磷酸化，将信号向下游传导，导致FAS的过度表达，PIK3CA、PIK3CB可能是连接ErbB-1、ErbB-2和FAS进行分子对话的桥梁。 4.在Ⅰ、Ⅱ乳腺浸润性导管癌，FAS与E-FABP、H-FABP的密切关系提示： E-FABP、H-FABP可能作为FAS下游分子的载体，结合和转运FAS合成的长链脂肪酸。 5．在Ⅲ级乳腺浸润性导管癌，随着FAS、E-FABP、H-FABP表达的下调，L-FABP对于肿瘤恶性特征的维持具有重要作用。FAS和VEGF的密切相关性提示：L-FABP和VEGF共同作用，补偿因FAS下调导致的氧气和脂肪酸的供应不足。

目录

声明

前言

第一部分PI-3K成员在乳腺浸润性导管癌的表达以及在ErbBs-FAS信号系统中的作用

引言

1.材料和方法

2.结 果

3.讨 论

结 论：

参考文献

第二部分脂肪酸结合蛋白在人乳腺癌组织的表达和意义

1.材料和方法

2.结 果

3.讨 论

结论：

参考文献

第三部分FAS和FABPs与乳腺浸润性导管癌组织学级数的关系

引言

1材料和方法

2.结 果

3.讨 论

结 论

参考文献

全文总结

综述1肿瘤相关FAS：与代谢有关的癌基因

综述2脂肪酸结合蛋白的研究进展

附 录

个人简历

致 谢