肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与顺铂和干扰素-α联合应用对人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的影响及其机制的研究

摘要

实验目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosisfactor-related apoptosis inducing ligand，TRAIL)、顺铂(DDP)、干扰素-α(IFN—α)三种药物联合作用对人肝癌细胞株SMMC7721的体外生长抑制和细胞凋亡的影响，并初步探讨其影响的机制。 实验方法：人肝癌细胞株SMMC7721培养于含10％新生小牛血清的RPMll640培养基置于37℃，5％CO2饱和适度培养箱体外培养。采用SRB染色分析不同浓度TRAIL、DDP、IFN—α对SMMC7721生长抑制的相关性，确定三种药物的IC50值及亚细胞毒剂量浓度。将亚细胞毒剂量浓度的三种药物分组为：TRAIL组、DDP组、IFN—α组、TRAIL+DDP组、TRAIL+IFN—α组、DDP+IFN—α组、TRAIL+DDP+IFN—α组，同时设置空白组、阴性对照组SRB染色法测定各组生长抑制率。采用SPSS12．0软件对各组抑制率进行单因素方差分析，R<0．05认为差异具有显著性；采用Weeb系数法判断两药和三药联用是否具有协同作用。通过AnnexinV—FITC/PI双染色，流式细胞术(Flow cytometry，FCM)检测各处理组对细胞凋亡率的影响：采用RT—PCR技术检测SMMC7721细胞TRAIL死亡受体DR4、DR5mRNA表达情况；采用Western Blot技术检测各处理组细胞caspase-9、bax、bcl-2蛋白表达情况。 实验结果： 1.SRB染色法显示三种药物对SMMC7721有明显的抑制作用，呈显著的剂量依赖性。TRAIL、DDP、IFN-α三种药物的亚细胞毒剂量浓度分别为1ug/ml、10ng/m1、2.5×10<'5>U/ml。TRAIL+DDP组、TRAIL+IFN-α组、DDP+IFN-α组生长抑制率分别为：26.00％±1.17、37.81％±5.97、29.09％±3.43；细胞凋亡率为9.1％、12.1％、12.6％。TRAIL+DDP+IFN-α组生长抑制率为65.19％±3.10；细胞凋亡率为40.1％。 2.半定量RT-PCR和Western blot结果显示不同处理组SMMC7721死亡受体DR4、DR5的mRNA和抗凋亡蛋白bcl-2较阴性对照组和其他用药组无明显变化；而促凋亡蛋白caspase-9、bax在TRAIL+DDP+IFN-α组表达量高于阴性对照组和其他用药组。 实验结论： 1.TRAIL+DDP组、TRAIL+IFN-α组、DDP+IFN-α组与单独用药组有著差异但无协同效应；TRAIL+DDP+IFN-α组较单独用药和两两联合用药组既有显著差异又有协同效应。细胞凋亡率TRAIL+DDP+IFN-α组也较单独几两两联合用药组有明显提高。 2.TRAIL+DDP+IFN-α组对死亡受体DR4、DR5的mRNA和抗凋亡bcl-2的蛋白表达无影响，但能上调促凋亡蛋白caspase-9、bax的蛋白表达。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

1材料和方法

2实验结果

3讨论

结论

参考文献

综述 TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡信号途径转导中的抗凋亡机制

致谢