蛋白酶体抑制剂-万珂对体外混合淋巴细胞反应的干预研究

摘要

移植物抗宿主病(Graft-versus-Host disease简称GVHD)是造血干细胞移植死亡的重要原因，其发病机制主要涉及到三个方面：1．预处理组织损伤与细胞因子活化；2．供者T细胞活化；3．宿主靶器官损伤。近年来NF-κB在GVHD的发病中的作用受到重视，有研究发现NF-κB与树突状细胞抗原提呈有关<'1>，并且通过阻断NF-κB与IL-12的基因组DNA结合下调IL-12的表达可以抑制免疫反应<'2>。GVHD的防治策略主要有细胞因子的屏蔽、阻断T细胞与抗原提呈细胞(APC)之间的相互作用及诱导免疫耐受三个方面。万珂作为最早用于临床的蛋白酶体抑制剂，有研究显示其在免疫调节和防治GVHD方面可能存在一定的前景。 目的： 1．在体外HLA配型不相合、半相合、全相合混合淋巴细胞反应体系中观察细胞增殖的差异及万珂对细胞增殖的影响。 2．观察体外单向混合淋巴细胞反应体系NF-κB mRNA表达量在万珂干预前后的差异，探讨其在GVHD发病中的作用及万珂可能的免疫调节机制。 3.通过检测细胞上清液细胞因子的含量探讨Th1、Th2细胞在GVHD发病中的作用。 方法： 1.选择拟行骨髓移植的HLA全相合、半相合病人及其供者，另选择两位HLA不相合的无血缘关系的健康志愿者建立体外混合淋巴细胞反应体系。抽取外周血10ml/人，以供者T淋巴细胞作为反应细胞，受者单个核细胞作为刺激细胞(钴60辐照25Gy)，MTT法测吸光度，计算细胞增殖率。万珂分别于体系建立同时及培养72小时后加入。 2.反应体系建立后5天按常规方法提取mRNA，RT-PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳半定量分析。 3.反应体系建立后5天收集细胞上清液，ELISA法检测上清IL-4、IFN-γ含量。 结果： 1.在混合淋巴细胞培养中供者T细胞刺激后明显增殖(p<0.05)，其中以完全不相合组增殖最明显(p<0.05)。万珂处理后增殖率明显下降(p<0.05)，万珂早期干预比晚期干预增值率下降更明显(p<005)。 2.供者T细胞刺激后NF-κB mRNA量增加，以完全不相合组最明显(p<0.05)。万珂处理后NF-κB mRNA量减少，全相合组万珂早期干预比晚期干预下降明显(p<0.05)，不相合组和半相合组万珂不同时间干预无明显差异。 3.供者T细胞刺激后IL-4及IFN-γ含量均有增加(p<0.05)，但以IFN-γ，增加更为显著。万珂处理后两者均减少(p<005)。 结论： 1. 万珂对受同种异体抗原刺激的T细胞的增殖有抑制作用，早期干预效果优于晚期干预。 2．抑制NF-κB mRNA的转录是万珂抑制T细胞的增殖的可能机制。 3．Th1细胞受异体抗原刺激后增殖较Th2细胞明显，万珂对Th1细胞和Th2细胞均有抑制作用。

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前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

综 述　万珂、NF-κB与GVHD

致 谢