川产青牛胆的分子标记与化学成分研究

摘要

防己科青牛胆属药用植物青牛胆Tinospora sagittata，(Oliv.)Gagnep和峨嵋青牛胆T.sagittata var.craveniana(S.Y Hu)H.S.Lo为川产药材金果榄Radix Tinosporae的两种基源植物，青牛胆为中国药典所收载。据调查，部分川产青牛胆与峨嵋青牛胆植物形态差异较大，即使同一产地不同居群的青牛胆植株，尤其是叶片形态差异极大。这些形态上的差异是生态型，还是是不同的物种，有必要从分子水平探讨。本课题分别从传统生药学、现代分子生物学以及化学成分方面探讨了不同产地、不同形态、野生与家种青牛胆，以期在川产青牛胆的物种鉴定以及遗传育种等方面取得进展，为进一步开发利用提供科学依据。 1.对所采集的青牛胆和峨嵋青牛胆进行了原植物、性状和显微鉴定。结果表明，除原植物叶片形状及大小有区别外，其他方面无明显差异。 2.首次采用RAPD(随机扩增多态性DNA)技术，对采自4个地区6个居群的32个DNA样品用筛选的15个RAPD引物进行扩增，进而进行聚类分析。 3.首次采用：ISSR(简单重复序列标记)技术，对采自4个地区6个居群的10个DNA样品用筛选的6个ISSR引物进行扩增，进而进行聚类分析。 4．首次建立了川产青牛胆的SRAP(相关序列扩增多态性)反应体系，并对体系进行了优化，为进一步的川产青牛胆的SRAP鉴定奠定了方法学基础。 5．从青牛胆块根的80％乙醇提取物中分离得到6个化合物，运用TLC、HPLC、1H-NMR等方法鉴定了这6个化合物：非洲防己苦素(colum‘bin)(I)、棕榈酸(palmitic acid)(Ⅱ)、β-谷甾醇(β-sitoster01)(Ⅲ)、巴马汀(palmatine)(Ⅳ)、非洲防己碱(columbamine) (Ⅴ)和药根碱(iatrorrhizine)(Ⅵ)。为川产青牛胆的HPLC分析提供了对照品。 6．运用HPLC技术，建立了川产青牛胆的指纹图谱，探寻了川产青牛胆在生物碱类化学成分的差异。结果显示：不同产地的青牛胆所含化学成分差异较大，采自四川大学华西药用植物园的栽培样品中没有检出非洲防己碱，而其他9批野生的样品里都有检出。另外，采自四川巴中的披针形叶的青牛胆大部分化学成分含量明显高于其他样品。

目录

声明

前言

第一部分 生药学研究

1.原植物与生药性状

2.显微鉴定

第二部分 川产青牛胆分子标记研究

1川产青牛胆RAPD分析

2川产青牛胆ISSR分析

3川产青牛胆SRAP反应体系的建立与优化

第三部分 化学成分研究

1提取分离

2 HPLC分析

总结

参考文献

附图

综述：大孔树脂在天然产物分离纯化中的应用进展

致谢