MALT型结外边缘区B细胞淋巴瘤：未转化与转化肿瘤细胞间克隆性分析、基因表达谱及FOXP1基因表达的研究

摘要

背景和目的：MALT淋巴瘤(MALToma)的发生发展是一个连续多步的过程，并可发生大细胞转化使得疾病的恶性程度增加，提示MALToma中存在某种促进疾病演进的机制，然而这种机理尚未明确。本课题对MALToma中未转化与转化肿瘤细胞成分间的IgH基因重排、基因差异表达谱及FOXP1基因的表达情况进行检测分析，以确定未转化肿瘤细胞与转化大细胞间的克隆联系，筛选与转化相关的候选基因并评价FOXP1基因在未转化与转化MALToma中表达的意义，探讨MALToma发生转化的可能机制。 材料与方法：(1)选取6例伴有转化的MALToma病例，采用激光显微切割方法在石蜡切片上分别提取未转化与转化肿瘤细胞，通过PCR反应分别检测厦日基因重排，经序列测定并通过数据库分析二者间的克隆联系。(2)提取桥本氏甲状腺炎、未转化MALToma及转化的MALToma病例各一例新鲜组织的总RNA，反转录为cDNA，并在体外转录为cRNA，与含有38,500个人类基因的Human GenomeU133 Plus 2.0Array寡核苷酸芯片杂交，获得它们的基因差异表达谱，通过生物信息学分析，重点筛选MALToma与转化MALToma中显著差异表达的基因。(3)采用实时荧光定量PCR(101例)、免疫组织化学(115例)及Western blot(6例)等方法对MALToma及转化MALToma病例中FOXP1基因的表达水平进行检测，并分析其表达水平改变与临床病理及预后的关系。 结果：克隆相关性分析结果显示，6例病例各自的未转化与转化肿瘤细胞成分的IgH基因重排片段大小一致，测序证实4例发生重排的D区与J区节段和随机插入片段完全相同，2例在各自的D区和随机插入区分别有1个核苷酸的差异。 基因芯片检测结果显示：(1)相比桥本氏甲状腺炎，未转化MALToma相对表达水平升高2倍以上的基因共1123个，表达水平降低2倍以上的基因共1153个。相比未转化MALToma，伴有转化的MALToma相对表达水平升高2倍以上的基因共1488个，表达水平降低2倍以上的基因共1609个。(2)未转化与转化MALToma中表达上调的基因包括：FOXP1、Bcl6及MALT1基因；大量DNA复制与RNA合成相关基因。(3)转化MALToma中TGF-β信号通路基因表达下调。(4)在未转化与转化MALToma中，某些通路的相关基因表现为部分成员上调，部分成员下调，包括：凋亡和细胞周期相关基因、糖、脂、蛋白质及核酸代谢相关基因、心肌细胞钙调节相关基因、核糖体蛋白及整合素介导的细胞间粘附分子及翻译因子家族。 FOXP1的表达检测结果显示：(1)FOXP1基因mRNA(101例)和蛋白(115例)表达水平在转化MALToma中显著高于未转化MALToma；Western blot检测也显示FOXP1蛋白在转化MALToma(2例)中表达强于未转化MALToma(4例)。(2)FOXP1蛋白表达阳性组(核表达率≥30％)较FOXP1蛋白表达阴性组(核表达率<30％)容易出现大细胞转化(p=0.000)，细胞增殖指数高于阴性组(P=0.022)，在消化道MALToma中FOXP1蛋白表达与肿瘤浸润深度正相关(P=0.039)；FOXP1蛋白表达阳性组在发病年龄、性别及发病部位等方面与阴性组无异；FOXP1蛋白表达与API2-MALT1融合基因与Bel10蛋白核表达没有相关性：FOXP1蛋白表达阳性组生存情况差于阴性组，但对预后的影响不存在统计学意义(P=0.1123)。 结论：1．转化MALToma中未转化与转化肿瘤细胞成分为B细胞单克隆性增生，其转化大细胞起源于未转化小肿瘤细胞，但可能存在克隆内变异。2．桥本氏甲状腺炎、未转化MALToma与伴大细胞转化的MALToma具有不同的基因表达谱。3．FOXP1基因表达可做为MALToma发生大细胞转化的新指标。

目录

论文说明：缩略词表

声明

摘要

前 言

第一部分MALT型结外边缘区B细胞淋巴瘤：未转化与转化肿瘤细胞的克隆性研究

前言

材料与方法

结 果

讨 论

小 结

附图

第二部分利用基因芯片对未转化与转化MALToma基因表达谱的初步研究

前言

材料与方法

结 果

讨论

小 结

附图

第三部分FOXP1基因表达在MALToma中的意义研究

前言

材料与方法

结 果

讨论

小 结

附图

参考文献

文献综述 MALToma遗传学研究进展

个人简历

致 谢