亚砷酸钠诱导氧化损伤的体外实验研究

摘要

目的:研究亚砷酸钠(NaAs02)对人肺腺癌A549细胞的细胞毒性作用和氧化损伤作用，探讨其对DNA损伤特异性修复基因表达的影响，从而为阐明NaAsO<,2>是否直接导致DNA损伤提供体外实验依据，以便深入研究其氧化损伤作用同致癌作用之间的关系。 方法:用0、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、100.0μmol/L的NaAsO<,2>染毒A549细胞，观察细胞的生长特性，通过MTT实验记录染毒12、24、48、72 h的细胞存活率变化规律，并计算出NaAsO<,2>的细胞毒作用剂量，为后续实验提供染毒剂量参考；通过集落形成抑制实验观察NaAsO<,2>对细胞集落形成能力的影响；通过观察群体倍增时间检测NaAsO<,2>对细胞的增殖能力的影响。用没有明显细胞毒作用剂量的NaAsO<,2>染毒人肺腺癌A549细胞24 h，检测抗氧化酶活性，以观察NaAsO<,2>对细胞抗氧化能力的影响；体外微核实验检测NaAsO<,2>对A549细胞的染色体损伤效应；彗星实验比较苯并(a)芘(BaP)和NaAsO<,2>单独及联合染毒细胞后，细胞DNA氧化损伤与修复的差异，观察BaP、NaAsO<,2>染毒剂量和染毒顺序的交互作用，为NaAsO<,2>对DNA氧化损伤和修复的影响效应提供依据。最后，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫蛋白印迹(West blot)分别测定细胞中人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶-1(hOGGl)mRNA和蛋白表达量，观察NaAsO<,2>诱导的细胞氧化损伤和特异性修复基因hOGG1表达量之间的关系，从而为完善NaAsO<,2>的致癌机制提供更完整的参考。 结果:NaAsO<,2>具有极强的细胞毒性，其毒作用呈现毒物兴奋性剂量-反应关系。染毒后，A549细胞的MDA含量显著降低，SOD和GSH-Px活性变化的剂量一效应曲线呈倒置“U”形；NaAsO<,2>引起细胞微核形成增加；NaAsO<,2>单独作用不直接引起DNA损伤，但在联合BaP染毒时，却能显著增强BaP所致的DNA损伤，抑制损伤的修复，且NaAsO<,2>预作用24 h后观察到的DNA损伤较同时染毒和BaP预作用24 h观察到的DNA损伤更严重；NaAsO<,2>可以抑制hOGGlmRNA及其蛋白的表达，抑制作用有随剂量增加而增强的趋势。 结论:NaAsO<,2>具有明显的细胞毒性，能引起细胞氧化损伤，其单独作用时不直接损伤DNA，但能通过抑制DNA氧化损伤修复基因hOGGl的表达，降低细胞DNA损伤的修复，从而增强另一种基因毒物所致的DNA损伤。

目录

声明

摘要

前 言

第一部分：NaAsO2的细胞毒性及其对细胞生长的抑制作用

引 言

1 材料和仪器

2 实验方法

3 实验结果

4 讨 论

5 小 结

第二部分：NaAsO2对A549细胞的氧化损伤效应

引 言

1 材料和仪器

2 实验方法

3 实验结果

4 讨 论

5 小 结

第三部分：NaAsO2对细胞hOGG1基因表达量的影响

引 言

1 材料和仪器

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小 结

结 论

参考文献

附录

致 谢