血液系统疾病中LRP15基因甲基化状态的研究

摘要

为了准确了解DNA甲基化与细胞恶性转化的关系,有必要详细了解肿瘤DNA中特定序列的甲基化改变.LRP15基因是该室获得的一段急性白血病复发病人中NotI酶切位点甲基化的27kbp DNA序列.生物信息学分析表明,它是一个与人类急性白血病及其他肿瘤发生、发展密切相关的基因.为进一步从实验上证实该基因修饰水平的变化是否与白血病的发生发展相关,我们选择NPBSC、原代白血病细胞及正常细胞系、白血病细胞系作为研究对象,采用MS-PCR方法分别检测了LRP15基因的甲基化状况,结果显示COS7、K562、HL60细胞系及良性血液病、白血病、MDS标本中均未检测到LRP15基因的缺失;LRP15基因修饰水平的变化与恶性肿瘤有关,而与正常细胞的成熟幼稚与否无关;LRP15基因在AL中甲基化阳性率明显高于NPBSC,差异有统计学意义(p=0.000<0.05),表明LRP15基因甲基化与急性白血病有关;急性白血病的LRP15基因甲基化阳性率明显高于慢性白血病,x<'2>检验二者差异有统计学意义,其中8例CML患者LRP15基因均无阳性,而1例CML急变期患者LRP15基因甲基化呈阳性,提示LRP15基因甲基化可能对CML病情的发展和急性白血病的发生有意义;AL不同分型中LRP15基因甲基化阳性率无明显差异.除了LRP15基因在恶性肿瘤中的甲基化状况,我们还研究了其在非恶性血液病患者骨髓中的甲基化状况,MS-PCR结果表明LRP15基因在非恶性血液病患者骨髓中的甲基化阳性率为55.56%(5/9),与健康供者相比差异有统计学意义,表明LRP15基因甲基化不但与恶性肿瘤有关,与血液系统良性疾病也有一定关系.其中甲基化阳性的患者中4例与免疫系统疾病有关,初步提示LRP15基因甲基化可能对免疫系统疾病也有一定意义.为了进一步验证MS-PCR检测LRP15基因甲基化的准确性,排除污染的可能性,我们采用COBRA特异性引物,PCR扩增1例MS-PCR检测为甲基化、非甲基化双阳性的良性血液病(ITP)样本,得到257bp大小的目的片断,BstuI酶切鉴定,测序分析,结果表明,此例ITP患者骨髓中LRP15基因甲基化、非甲基化双阳性,进一步证实了MSPCR检测结果的准确性,LRP15基因甲基化与免疫系统疾病有关.

目录

英文缩略语

第一部分：白血病中LRP15基因甲基化状态的研究

前言

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

第二部分：血液系统良性疾病患者中LRP15基因甲基化状态的研究

前言

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

结论

无机砷和甲基化

老年性贫血病因学研究进展

致谢

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