模拟HCV HVR1免疫7肽对人不同免疫细胞分泌细胞因子影响的初步研究

摘要

目前针对慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染尚无切实有效的办法，以诱导机体产生细胞免疫为主的HCV治疗新疫苗，可通过重建感染者针对HCV的免疫应答，调动自身的免疫机能来清除病毒，减少非特异性炎症对肝脏的损害的作用。有可能是将来治疗慢性HCV感染的重要方法。本研究的课题是建立在我室长期对中国人群常见的HCV感染毒株(1b、2a)包膜蛋白E2高变区1(HVR1)序列变异规律的研究基础上，根据保守位点合成的一系列长度不等的HCVHVR1模拟表位。之前的研究中，已经验证了其中一个含有7个氨基酸的多肽(7P)能够诱导小鼠免疫应答。本课题主要是在此基础上，针对人不同免疫细胞，研究7P对人不同免疫细胞分泌细胞因子的影响，并初步探讨其机制。课题共分为三个部分。 (一)7P对正常人免疫细胞分泌细胞因子的影响 将7P与正常人的外周血单核细胞((PBMCs)共同孵育培养，然后通过检测免疫细胞内细胞因子分泌的改变来研究其免疫变化。结果表明，应用7P刺激正常人PBMCs后，分泌IFN-Y的细胞频数无论在NK细胞、NKT细胞以及CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴细胞均明显增高；而分泌IL-4的细胞频数则变化不明显。分泌IL-10的细胞频数在CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴细胞表现为升高，在NK细胞、NKT细胞表现为下降；而分泌TNF-α的细胞频数在CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴细胞表现为下降，在NK细胞、NKT细胞表现为升高。 (二)7P刺激免疫细胞分泌细胞因子改变的初步研究 首先将7P与正常人的外周血单核细胞((PBMCs)共同孵育培养，然后检测抗原呈递细胞(DC)成熟及细胞因子变化情况。结果表明应用7P刺激DC细胞时，成熟细胞表型的mDC细胞的频数明显下降：成熟的细胞表型的pDC细胞的频数未发生变化，代表mDC分泌功能的IL-12未能检测出来。提示7P体外刺激有可能够降低成熟mDC的表达，未能促进IL-12的分泌；但对pDC表达的影响尚不完全明确。其后采用细胞分选技术，将抗原提呈细胞从PBMCs中分离出去，剩余的成分中包括免疫反应的效应细胞T细胞和NK、NKT细胞，将其和7P共同孵育培养后检测细胞内细胞因子染色。结果表明，当应用磁珠分选之后其与7P共同孵育培养，能够得到与分选之前基本相同的结果。提示7P的这种对细胞因子分泌的调节可能是直接作用于效应细胞，同时对于抗原提呈细胞(DC)也具有直接或间接的作用，而这种作用也可能间接地影响效应细胞的细胞因子分泌。 (三)7P对HCV感染患者免疫细胞分泌细胞因子影响的初步研究 将HCV感染患者的PBMCs和7P共同孵育培养后检测细胞内细胞因子染色，来分析7P对HCV感染患者的免疫细胞的作用。与第一部分结果相比，INF-γ在NK及NKT细胞，IL-10在CD4+CD8-T细胞及CD4-CD8+T细胞的变化是一致的；而TNF-α在NKT细胞出现了相反的变化，即下降。同时，我们也注意到其他未发生具有统计学意义变化的部分，其变化的主要方向也往往和之前的实验结果趋向一致。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

第一部分7P对正常人免疫细胞因子分泌的影响的初步研究

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分7P刺激免疫细胞分泌细胞因子改变的初步研究

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第三部分7P对HCV感染患者免疫细胞细胞因子分泌影响的初步研究

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

HCV感染过程中相关细胞因子研究进展

攻读学位期间发表的文章

致谢