一个糖尿病家系肾阴阳两虚证基因表达谱研究

摘要

目的：将家系调查方法引入到复杂证候的研究中，精选一个糖尿病家系，研究与糖尿病肾阴阳两虚证相关联的基因表达谱，为证候分子生物学的现代化研究探索一条行之有效的研究道路。方法：结合国家标准及专家诊断，对一例家系内的糖尿病患者进行肾阴阳两虚证的判定。应用基因芯片技术，分别在3个子家系中将肾阴阳两虚型糖尿病患者与3名家系正常人做基因表达差异显示，并将三张芯片结果进行分析。对相关的临床生化检查进行分析。结果：在所有芯片结果中共有53条基因上调，有1012条基因下调，下调基因大约是上调的20倍左右。芯片1与2有5条基因共同上调，在1与3，2与3中都没有基因共同上调，芯片1与2中有14条基因共同下调，芯片1与3中有18条基因共同下调，在3张芯片中有10条基因共同表现下调。差异表达基因涉及能量代谢、细胞凋亡、细胞周期等各类，并与免疫、生殖、发育等多种功能基因有关。芯片结果中与代谢相关的差异表达基因占已知功能差异表达基因的20％左右。结论：(1)在同一家系中采用病证结合的方法进行基因水平的研究，由于遗传背景相似，生活环境相近，利于排除大量干扰因素，是在现有条件下进行证候分子生物学研究的一种可行方法。(2)本次实验通过家系研究，比较集中的展示出肾阴阳两虚证基因表达谱研究的发展前景：肾阴阳两虚证的分子生物学基础可能是大规模的基因下调；肾阴阳两虚证与多类基因相关，尤其代谢相关基因可能在肾阴阳两虚证的发生发展中起重要作用。

目录

论文说明：缩略词

引言

1资料与方法

1.1研究对象

1.1.1研究家族的选择

1.1.2研究对象的诊断标准

1.2实验材料试剂、仪器

1.3实验方法

1.3.1芯片实验分组

1.3.2临床生化指标及症状得分实验分组

1.3.3标本采集

1.3.4 cDNA表达谱芯片

1.3.5芯片的质量标准控制

1.3.6探针制备

1.3.7芯片杂交

1.3.8检测与分析

1.4观察指标

1.4.1差异表达基因

1.4.2临床生化

1.5基因数据分析

1.5.1图像获取

1.5.2检测与分析

1.5.3标准化处理

1.5.4 Ratio分析

1.5.5聚类分析

1.6统计方法

2结果

2.1证候家系图

2.2症状得分统计结果

2.3基因表达谱

2.3.1差异基因表达谱

2.3.2Cluster聚类显示

2.3.3差异表达的基因数目初步统计

2.3.4三张芯片共同表达的差异基因

2.3.5芯片1与芯片2共同表达的差异基因

2.3.6芯片1、3共同下调的差异基因

2.3.7芯片2、3共同下调的相关差异基因

2.3.8芯片2中差异表达基因分类

2.3.9芯片3中差异表达基因分类

2.3.10与糖尿病相关的差异表达基因

2.4临床生化指标结果

2.4.1肾功

2.4.2血脂

3讨论

3.1将家系方法引入证候研究的重要意义

3.2肾阴阳两虚证宏观证候研究

3.3肾阴阳两虚证微观差异表达基因分析

3.3.1肾阴阳两虚证与大规模的基因下调

3.3.2肾阴阳两虚证与代谢相关基因

3.3.3肾阴阳两虚证与多类功能基因

3.3.4肾阴阳两虚与糖尿病相关基因

3.4肾阴阳两虚糖尿病生化指标分析

结论

问题与展望

致谢

参考文献

综述 肾虚血瘀型糖尿病研究近况

参考文献

公开发表的学术论文

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