银翘散对流感病毒感染小鼠模型肺组织mBDF1表达的影响

摘要

目的：探讨银翘散对流感病毒感染模型小鼠肺组织β-defensin1基因表达的影响，部分揭示中药复方抗病毒免疫调控机制，为促进银翘散防治流感病毒的临床应用提供实验依据。 方法：(1) 流感病毒传代与效价测定。流感病毒A／Fort Monmouth／1／47(H1N1)接种9日龄鸡胚尿囊腔传代,红细胞血凝实验测定病毒效价。(2) 流感病毒模型小鼠制作方法。乙醚轻度麻醉下以不同浓度的流感病毒液50ul滴鼻感染昆明小鼠，测定昆明小鼠的LD50。(3) 动物分组与治疗方法。昆明小鼠70只随机分成中药组、西药组、模型组。在乙醚轻度麻醉下以4LD50感染昆明小鼠，感染前两天开始给药，中药组以银翘散60g/kg/d灌胃；西药组以病毒唑0.07g/kg/d腹腔注射；模型组等量生理盐水灌胃，d2组，d4组，d8组的中药组和西药组的小鼠分别在感染后的第2天，第4天，第8天处死，取肺组织匀浆提取RNA，使用Real-time-PCR方法检测各组小鼠肺组织β-defensin1表达情况。实验结果用均数士标准差（±s) 分析，继以SPSS10.0进行统计处理，分析组与组之间的差异。 结果：(1) 鸡胚尿囊腔传代后的流感病毒(H1N1) 出现血凝反应的最低病毒稀释度为1:640，符合做动物实验的毒力要求。(2) 小鼠感染流感病毒模型组发病在2天以后，感染小鼠出现耸毛、卷缩、毛无光泽、活动减少、食量减少、体重减轻、逐渐衰竭，大多于第7天开始死亡。LD50=6.5，即将病毒悬液稀释成10-6.5，可使鼻腔接种0.1ml病毒后的小鼠50%死亡。(3) 各基因扩增产物只有单一峰值，说明扩增产物具有特异性。M-DEFB1和M-ACTB基因扩增产物大小分别为：195 bp和111bp。各自的基因产物片断长度与设计长度相吻合，证明我们所检测的基因扩增产物为我们欲检测的目的基因产物。(4) 中药组、西药组较模型组的表达量增高，且差异显著；中药组、西药组的mBDF1表达量在感染后第1～8天均呈现先升高后降低的变化，mBDF1表达量都在第4天呈现高峰，每一时间点均较前一时间点有显著变化。(5) 感染后第2天中药组mBDF1表达量(22.74±1.410)较西药组(21.10±1.531)增高明显，第8天西药组mBDF1表达量(22.76±0.783) 较中药组（20.20±11.367）高。 结论：(1) 体内实验研究表明，银翘散能够在流感病毒感染早期显著升高肺组织BDF1mRNA表达量，表明银翘散在机体受到感染初期发挥天然免疫防御作用。(2) 银翘散能通过某种机制上调流感病毒感染小鼠肺组织内BDF1mRNA的表达量，来发挥抗流感病毒的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前 言

第一部分 流感病毒感染的理论探讨

第二部分 实验研究

附图

讨 论

结 论

展 望

致 谢

参 考 文 献

附件1：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果