电针、埋线对吗啡耐受小鼠自发性昼夜节律的影响及其机制的对照研究

摘要

目的：
　　对照观察电针、埋线疗法对吗啡耐受模型小鼠自发性昼夜活动节律特征的作用，以及对模型小鼠视交叉上核（SCN）中生物钟基因Per1、Per2的表达的影响，研究两种治疗方法的异同，为电针、埋线疗法应用于临床药物耐受的治疗提供新的科学依据。
　　方法：
　　将符合实验筛选标准的雄性C57BL/6J近交系小鼠32只，随机分为空白对照组（Control,n=8），耐受模型组（Model,n=8），电针治疗组（Electro-Acupuncture，n=8），埋线治疗组（Catgut Embedding,n=8）。耐受模型组、电针治疗组、埋线治疗组皮下注射盐酸吗啡注射液（注射剂量为10mg/kg，每天注射2次，注射时间为8am，8pm，连续给药7天）以建立吗啡耐受模型，空白对照组在同时间点给予等比例生理盐水10ml/kg。同时电针治疗组于每日上午注射吗啡后开始用韩式电针仪（HANS-2000）行双侧“肾俞”穴（BL23）电针治疗（电流0.2mA，频率2/15Hz，每次治疗15min，每天1次，连续治疗7天），埋线治疗组于造模第一天注射吗啡后行双侧“肾俞”穴埋线治疗。各组分别在第1、3、5、7天注射吗啡或生理盐水后30min开始行小鼠光热甩尾潜伏期测定，作为痛阈指标。第7天在测定痛阈后处死小鼠并快速在冰盘上取下组织SCN，用RT-PCR方法检测小鼠SCN中Per1、Per2基因的表达变化。
　　结果：
　　1、行为学结果：
　　1)、痛阈：实验各组初痛阈进行比较，无明显统计学差异（P>0.05）,而在开始造模后的七天中，空白对照组小鼠的痛阈与其初痛阈相比，差异无明显统计学意义（P>0.05）。这说明小鼠在注射生理盐水后，痛阈无明显变化。耐受模型组、电针治疗组、埋线治疗组在第1、3、5天注射吗啡后，测得痛阈值明显升高，与其初痛阈相比差异有明显统计学意义（P<0.05）。耐受模型组第7天的痛阈值较初痛阈相比，无明显统计学差异（P>0.05）；电针治疗组和埋线治疗组第7天痛阈与各自初痛阈相比，差异均有统计学意义（P<0.05），两治疗组第7天痛阈比较差异无明显变化。
　　2)、体重：在实验注射药物前筛选的各组小鼠间体重变化无明显差异（P>0.05），在实验7天中与空白对照组相比，耐受模型组、电针治疗组、埋线治疗组均有统计学意义（P<0.05），耐受模型组与电针治疗组、埋线治疗组相比，差异有明显统计学意义（P<0.05），但电针与埋线治疗组之间差异无明显变化（P>0.05）。
　　2、自发性活动昼夜节律：实验前各组将符合标准的实验小鼠周期、振幅、总活动度进行统计换算，统计结果显示各组小鼠间周期、振幅、总活动度差异无明显统计学意义（P>0.05）。实验7天后将各组周期进行前后差值两两比较差异无统计学意义（P>0.05）。各组小鼠实验前后振幅差值比较，空白对照组与耐受模型组、电针治疗组、埋线治疗组相比，差异有明显统计学意义（P<0.05），耐受模型组与电针治疗组、埋线治疗组相比有明显统计学意义（P<0.05）,而电针治疗组和埋线治疗组比较差异不明显（P>0.05）。实验前后总活动度差值，与空白对照组相比，耐受模型组、电针治疗组和埋线治疗组均有统计学意义（P<0.05），与耐受模型组相比，电针治疗组和埋线治疗组差异无明显统计学意义（P>0.05），电针治疗组与埋线治疗组相比亦无统计学意义。
　　3、Per1、Per2基因在SCN中的表达水平：通过比较实验各组per1基因表达水平变化发现，耐受模型组较空白对照组基因表达水平差异有统计学意义（P<0.05），与耐受模型组相比，电针治疗组per1基因表达水平上调有明显统计学意义（P<0.05），埋线治疗组统计学结果显示无意义（P>0.05）。在比较per2基因的表达变化时，统计学结果显示，与空白对照组相比，耐受模型组的per2基因表达水平有明显差异，有统计学意义（P<0.05），与耐受模型组相比，电针治疗组有统计学意义（P<0.05），而埋线耐受组则无明显统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　1、实验小鼠在反复多次注射吗啡后，体重有明显下降，痛阈值提示在第7天无镇痛效果，标志吗啡耐受形成；通过电针、埋线疗法均可以缓解吗啡耐受小鼠体重、痛阈值的下降趋势，延长镇痛时间，抑制耐受的形成；
　　2、吗啡耐受小鼠的自发性昼夜活动节律有明显的振幅降低、活动量减少的生物节律紊乱表现，电针、埋线疗法均可以纠正振幅降低的生物节律紊乱，二者疗效无显著性差异；
　　3、小鼠在吗啡耐受形成后，其SCN中Per1、Per2基因表达水平都有下调，说明吗啡耐受的形成与Per基因的表达有关，电针疗法能够上调吗啡耐受模型小鼠的节律相关基因Per1、Per2的表达量，而埋线治疗对Per1、Per2的上调不明显。

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引言

1、电针、埋线调整吗啡耐受模型小鼠自发性昼夜节律的变化

1.1 实验材料

1.2 实验方法

1.3实验结果

2、电针、埋线调整吗啡耐受模型小鼠Per基因的表达水平的变化

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果

讨论

1、中医学对生物节律的认识

2、中医学对吗啡耐受的认识

3、现代医学对吗啡耐受的研究

4、电针、埋线治疗吗啡耐受的影响

5、Per基因与吗啡耐受的关系

6、吗啡耐受模型建立

7、穴位选择分析

8、实验结果分析

结论

问题与展望

致谢

参考文献

附录 中医药择时治疗的研究进展

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研

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