“气阴两虚,瘀血阻滞”化纤系列方对肺纤维化大鼠E-钙黏蛋白、α-平滑肌蛋白、波形蛋白基因表达的影响

摘要

研究背景：肺纤维化(pulmonary fibrosis，PF)是由多种原因引起的严重肺间质慢性疾病。其发生的主要病理特点是早期以下呼吸道急性炎症反应为主，包括肺泡炎、间质性肺炎、肺泡上皮受损、巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞浸润，并伴随着大量成纤维细胞和肌成纤维细胞病理性增生转型，导致后期细胞外基质(extracellular matrixReal-time，ECM)成分在肺泡和间质内沉积，纤维组织过度修复造成肺组织结构的紊乱取代正常的肺组织结构，其实质为肺泡损伤、胶原沉积，最终导致肺纤维化。其临床主要表现为进行性呼吸困难、喘息、气短、咳嗽咯痰，以限制性通气功能障碍，低氧血症为主，最终导致呼吸衰竭，是呼吸系统最严重疾病之。随着诸多生命科学理论研究，实验手段的多样化，中医药研究者从器官、组织、细胞、分子层次，对肺纤维化的机制的深入研究，并取得极大的进展。相关研究显示肺纤维化是由与早期组织损伤、炎症变化发展而来，而肺部受感染或损伤后，肺泡上皮细胞是最早受到损伤的靶细胞。并且最初肺损伤后发生于组织修复时的肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转化(epithelialt to mesenchymaltransiti，EMT)在肺纤维化发生发展过程中发挥着极其重要的作用。近年来随着对肺纤维化的发病机理的深入研究,本团队在长期的临床实践中，依照临床经验创立的化纤系列方，其水煎剂对肺纤维化患者有一定的疗效。本课题中我们主要研究“气阴两虚，瘀血阻滞”化纤方对EMT径关键蛋白基因E-钙黏蛋白(E-cadherin，E-cad)、α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)、波形蛋白(vimentin)表达的影响，在分子水平上探讨该方药不同拟方对博来霉素肺纤维化大鼠的影响，以及这两方对该动物模型在该治疗时间的效用。
　　目的：通过观察博来霉素经典肺纤维化大鼠模型在中药治疗疗程中E-钙黏蛋白、α-平滑肌蛋白、波形蛋白表达的变化，在分子水平上探讨“气阴两虚，瘀血阻滞”化纤系列方化纤A方(HA)、化纤B方(HB)对博来霉素肺纤维化大鼠的影响。方法：3月龄SPF级健康SD大鼠72只，体重180±20g，雌雄各半。随机组与模型组并造模，造模后第2天开始治疗，连续28d。观察各组动物一般情况，于造模第7、11、23、28天，分别选取模型组对应时间点组大鼠；其余各组于治疗28天后取样。称重，股动脉取血，观察肺叶表观改变。左肺组于10％中性甲醛固定，HE、Masson染色后行肺泡炎分级评分和肺纤维化分级评分。右肺组织用于进行QPCR检测E-cadherin mRNA、α-SMA mRNA、vimentin mRNA的表达。采用spss19.0对数据进行统计学分析。
　　结果：肺系数：B28组肺系数显著大于P、HA、HB组(P＜0.01)。病理学观察：造模后大鼠肺组织在第7天时肺泡炎症细胞充斥肺间质,肺间质增宽。第11天炎症细胞减少但伴有出血点出现,第23天肺间质炎症减轻,散在出血点减少,并伴随胶原沉积。第28天可见大量胶原蛋白沉积,肺纤维化初期主要以肺泡炎为主，后期以纤维化为主。相关基因的表达：B、P、HA、HB组大鼠肺组织中的E－cad基因表达下调，而与HB组的E-cad的mRNA表达量均值均大于模型组且有统计学差异(P＜0.05)，HA组与HB组的E-cad的mRNA表达量有统计学差异(P＜0.05)。B28、HB的α-SAM的mRNA表达量出现统计学差异(P＜0.05)，HA与HB的α-SAM的mRNA表达量具备统计学差异(P＜0.01)。HB的vimentinm的mRNA表达的上调量显著低于B28(P＜0.05)，HA与HB的α-SAM的mRNA表达量有显著差异(P＜0.05)，且HB的vimentinm的mRNA表达量低于HA。
　　结论：1化纤A方(HA)与化纤B方(HB)对博来霉素致大鼠肺纤维化模型的肺泡炎和肺纤维化有一定疗效。2化纤B方对肺纤维化作用机制可能与α-SMA、vimentin、E-cad表达变化有关即延缓EMT发展过程。3博来霉素致经典肺纤维化大鼠动物模型适应用于“气阴两虚，瘀血阻滞”型肺纤维化的证型研究，该结果显示化纤B方更适用于该症。

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缩略词表

引言

1.现代医学对肺纤维化的研究现状

2.中医对肺纤维化的研究成果

2.1.肺纤维化的基本病机多样，病机随病程发展有一定差异

2.2.肺纤维化的中医辨证论治

2.3.中药治疗肺纤维化相关研究

动物实验

1.材料和方法

1.1.实验材料

1.2.实验方法

1.3数据分析

2.实验结果

2.1.各组动物基础体征

2.2.各组大鼠肺系数

2.3组织病理学观察

2.4 .相关基因 mRNA的表达

3.讨论

3.1肺纤维化的分子病理学机制

3.2博来霉素致肺纤维化动物模型及评价

3.3肺纤维化大鼠肺组织中E‐cad mRNA表达

3.4肺纤维化大鼠肺组织中α‐SAM mRNA表达

3.5肺纤维化大鼠肺组织中vimentin mRNA表达

3.6化纤A方与化纤B方的差异与BLM肺纤维化大鼠模型评估

3.7中医培土生金理论对疾病发展的影响

4.结论

5.问题和展望

致谢

参考文献

附图

综述: 从中医病因病机探讨肺纤维化的防治

综述: 中药化纤方治疗肺纤维化的分子机制研究进展

附件1：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果（示例）

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