加减三甲散对肝纤维化大鼠模型血流变及iNOS和ET-1的影响

摘要

目的：
　　观察加减三甲散对免疫性肝纤维化大鼠血液流变学以及血管活性物质一氧化碳氧合酶（iNOS）和内皮素-1（ET-1）的影响，探讨三甲散抗肝纤维化的效果和作用机理。
　　方法：
　　选用健康清洁级Wistar雄性大鼠24只，随机分组设正常对照组（简称正常组或空白组）6只、模型对照组6只（简称模型组）、阳性对照组（简称鳖甲片组）6只和加减三甲散组（简称三甲散组）6只，适应性饲养一周后，除正常对照组外其余三组均采用猪血清腹腔注射复制免疫损伤性肝纤维化动物模型。造模后，各组给与灌胃给药，1次/d，正常对照组及病理模型组给予同体积的0.9％生理盐水灌胃，三甲散组给予加减三甲散方药物灌胃，鳖甲片组给予复方鳖甲软肝片灌胃，灌胃治疗60天后，麻醉处死各组大鼠，HE和MASSON染色观察肝脏病理形态，测定凝血指标PT、APTT、TT、FlB全自动血液流变学检测仪检测血液流变学指标，免疫组化检测肝组织中iNOS和ET-1的含量，RT-PCR技术检测肝组织中iNOS和ET-1的mRNA表达。
　　结果：
　　1.肝脏病理形态学观察：HE和MASSON染色后，光镜下正常组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞未见变性及坏死，无明显纤维结缔组织增生。模型组大鼠肝组织正常结构被破坏，肝索排列紊乱，肝细胞肿胀，部分出现脂肪或气球样变，门管区及肝小叶内可见灶性淋巴细胞浸润，间质细胞大量弥漫性增生，中央静脉周边及汇管区出现大量纤维组织，形成纤维桥连接。
　　2.凝血功能的观察：与空白组相比较，模型组PT、APTT、TT水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；三甲散组、鳖甲片组PT、APTT、TT水平较模型组水平低，差异有统计学意义（P<0.05）；两治疗组间PT、APTT、TT水平的差异无统计学意义（P>0.05）；各组间FIB下降无统计学意义（P>0.05）。
　　3.血流变学相关指标检测：与正常组相比，模型组大鼠全血黏度200/s切变率、5/s切变率、血浆黏度、HCT、红细胞聚集数、ESR显著升高（P<0.05）；与模型组相比，三甲散组、鳖甲片组的全血黏度200/s切变率、5/s切变率、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集数、血沉显著降低（P<0.05），差异具有统计学意义；三甲散组、鳖甲片组200/s切变率、5/s切变率，血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集数、血沉无明显差异（P>0.05）。
　　4.与空白组相比较，模型组iNOS、ET-1含量明显升高，差异具有统计学意义（P<0.01）；三甲散组、鳖甲片组iNOS、ET-1含量比空白组要高，差异具有统计学意义（P<0.05），而相比较模型组，则明显降低，差异具有统计学意义（P<0.01）；三甲散组与鳖甲片组iNOS、ET-1含量无明显差异（P>0.05）。
　　5.与空白组相比较，模型组iNOSmRNA、ET-1mRNA含量明显升高，差异具有统计学意义（P<0.01）；三甲散组、鳖甲片组iNOSmRNA、ET-1mRNA含量与空白组无差别（P>0.05），而相比较模型组，则明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；三甲散组与鳖甲片组iNOSmRNA、ET-1mRNA含量无明显差异（P>0.05）。
　　结论：
　　1.加减三甲散可改善肝纤维化大鼠凝血功能，具有一定的抗肝纤维化效果。
　　2.加减三甲散可改善大鼠不同切变率的全血粘度（200/s、5/s）、血浆粘度、血细胞压积、红细胞聚集数、血沉，此可能为其改善肝窦微循环障碍，对抗纤维化的机制之一。
　　3.加减三甲散能够降低血管活性物质iNOS、ET-1含量及其mRNA的表达，具有改善大鼠肝脏微循环，缓解肝脏缺氧状态的作用。

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目录

引言

第一部分 理论研究

1.肝纤维化的现代医学认识

1.1病因

1.2发病机制

1.3诊断

1.4治疗

2.中医学对肝纤维化的认识

2.1病名

2.2病因病机

2.3辨证论治

3.“主客交”理论

3.1“主客交”理论、络病学说与肝纤维化

3.2“主客交”理论与络病学说的关系

3.3透邪通络代表方——加减三甲散

3.4“主客交”理论、络病学说与肝纤维化

第二部分 实验研究

1.实验材料

1.1实验动物

1.2药品与试剂

1.3主要实验仪器与设备

2.实验方法

2.1动物分组

2.2造模方法

2.3治疗给药

2.4实验取材

2.5观察指标及方法

2.6数据分析

3.实验结果

3.1各组大鼠一般情况

3.2大鼠肝脏肉眼形态观察

3.3肝组织病理形态观察

3.4肝脏凝血功能检测

3.5血流变中全血粘度、红细胞压积、血沉检测

3.6 ET-1、iNOS含量检测

3.7内皮素-1、诱导型一氧化氮合酶mRNA表达

4.分析与讨论

4.1造模方法的选择与评价

4.2对肝纤维化凝血指标的影响

4.3对血液流变学中相关指标的影响

4.4对INOS、ET-1的影响

4.5对ET-1mRNA、iNOSmRNA的影响

5.结论

6.问题与展望

致谢

参考文献

综述：微循环障碍在肝纤维化发展中的研究进展

附录

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