补肾醒脑法对2型糖尿病认知功能障碍小鼠性激素信号通路相关激素水平、海马Erα和ErβmRNA的影响研究

摘要

本论文分为2型糖尿病(Type2Diabetes Mellitus T2DM)认知功能障碍与性激素信号通路相关性的理论探讨和科学研究两部分。
　　第一部分 理论探讨
　　从祖国医学的角度出发，结合导师观点和自身研究，对消渴呆病（糖尿病认知功能障碍）的定义、病因病机、辨证论治和现代医学研究进行简要阐述。
　　第二部分 科学研究
　　目的：研究2型糖尿病小鼠性激素信号通路中下丘脑-垂体-性腺轴（Hypothalamic-pituitary-gonadal axisHPG）中相关激素水平、海马中Erα和ErβmRNA水平的表达，进而明确补肾醒脑法改善2型糖尿病认知功能障碍小鼠的认知能力与其对性激素信号通路某些环节的调控的相关性。
　　方法：健康清洁级雌性8周龄昆明小鼠，为正常对照组；健康SPF级（specific pathogen free无特定病原体级）雌性8周龄KKay小鼠为实验组。KKay小鼠，经去势手术和糖尿病认知功能障碍成模检测成功后随机分为模型对照组、阳性对照组、中药组和中药去势组（中药去势组先行去卵巢手术）。阳性对照组予吡拉西坦；中药组、中药去势组予醒脑益智合剂；KKay小鼠糖尿病造模成功后均予罗格列酮常规控制血糖。给药周期共计8周。在糖尿病成模后和给药结束后分别各进行一次Morris水迷宫实验。第二次水迷宫实验结束后，及时于冰上进行实验动物解剖及样本制备。酶联免疫分析法(Enzyme linked immunosorbent assay ELISA)检测各组小鼠相关性激素水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-timePolymerase Chain ReactionQRT-PCR）测定海马中雌激素受体1(Estrogen receptorErα)和雌激素受体2(Estrogen receptor Erβ)mRNA的表达。
　　结果:（1）第一次水迷宫实验结果中正常对照组和各组糖尿病小鼠平台潜伏期比较，各组均明显偏高（P＜0.05），可见T2DM小鼠认知能力显著低于正常小鼠。去卵巢后小鼠和其他各组小鼠比较P<0.05，说明去势后急速衰老的T2DM小鼠认知能力显著低于正常小鼠和壮年的T2DM小鼠。第二次水迷宫实验结果中正常对照组和模型对照组、中药去势组的小鼠比较P<0.05，说明这两组的认知能力显著低于正常对照组。给药前后比较：中药去势组、阳性对照组和中药组水迷宫成绩第二次都明显好于第一次（P<0.05），即经吡拉西坦治疗后T2DM小鼠和醒脑益智合剂治疗后的T2DM小鼠、去势的T2DM小鼠认知能力均明显提高。
　　（2）在HPG轴性激素水平研究中发现：模型对照组E2、P水平显著低于正常组（P＜0.05）。模型对照组、阳性对照组、中药去势组的LH、FSH、PRL水平显著高于正常组（P＜0.05），说明T2DM KKay小鼠、阳性对照组和急速衰老T2DM KKay小鼠的LH、FSH、PRL出现紊乱。而T的变化不大，没有明显统计学差异。在经过醒脑益智合剂治疗后中药组E2、P显著高于模型对照组（P＜0.05）。中药组和正常对照组，中药去势组与模型组E2、P、LH、FSH比较时P＞0.05，没有明显统计学差异，这说明使用醒脑益智合剂治疗2型糖尿病认知功能障碍KKay小鼠和其急速衰老小鼠模型是有效的，能调节HPG轴性激素的紊乱，纠正E2、P的低水平，降低LH、FSH的过高水平。
　　（3）在小鼠海马Erα和ErβmRNA的表达研究中：T2DM KKay小鼠和去势的T2DM KKay小鼠Erα和ErβmRNA表达显著低于正常水平（P＜0.05）；模型对照组和中药组比较P＜0.05，有明显统计学差异，模型对照组和中药去势组比较P＞0.05，没有明显统计学差异，说明经醒脑益智合剂治疗T2DM KKay小鼠和去势T2DM KKay小鼠Erα和ErβmRNA表达能有所提高。中药治疗后T2DM KKay小鼠的Erα和ErβmRNA表达显著高于模型对照组；治疗后去势T2DM KKay小鼠Erα和ErβmRNA表达升高接近模型对照组。阳性对照组和中药去势组、模型对照组ErαmRNA表达比较P＜0.05，有明显统计学差异，说明吡拉西坦对小鼠ErαmRNA表达有一定影响，使ErαmRNA表达在一定程度上升高。模型对照组和阳性对照组ErβmRNA比较P＞0.05，没有明显统计学差异，说明吡拉西坦对T2DM小鼠ErβmRNA表达影响不大。
　　结论:在常规控制血糖的基础上，醒脑益智合剂能有效提高T2DM认知功能障碍小鼠和去势后急速衰老的T2DM认知功能障碍小鼠的学习、记忆能力，其可能的作用机制可能是通过调整HPG性激素的水平，升高E2、P，降低LH、FSH；增强大脑海马Erα和ErβmRNA水平的表达而达到的。

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英文摘要

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缩略语表

引言

参考文献：

上篇 理论探讨

一、中医对糖尿病认知功能障碍病名的记载

二、中医对糖尿病认知功能障碍症状的描述

三、中医对糖尿病认知功能障碍病位的认识

四、中医对糖尿病认知功能障碍病机的认识

五、中医对糖尿病认知功能障碍的辨证

六、中医对糖尿病认知功能障碍的治法

七、中医治疗糖尿病认知障碍的方药

八、现代医学对糖尿病认知功能障碍的认识

参考文献：

下篇 动物实验研究

技术路线

第一部分 性激素对2型糖尿病小鼠认知功能的影响及醒脑益智合剂调控作用的研究

前言:

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结

讨论一

讨论二

讨论三

讨论四

参考文献

第二部分 醒脑益智合剂对2型糖尿病认知功能障碍小鼠海马Erα和Erβ的影响

前言:

1实验材料

2 实验方法

3 实时定量PCR操作步骤

4 统计学分析方法

5 实验结果

6 小结

讨论一

讨论二

参考文献：

结论

问题和展望

综述:认知功能障碍与糖尿病

致谢

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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