补肾活血法对肾虚血瘀型不育患者精子DNA完整性的临床研究

摘要

目的：
　　探讨补肾活血法（强精片）的抗氧化作用对肾虚血瘀型男性不育症患者精子DNA损伤的影响，初步探究补肾活血法（强精片）改善精子DNA损伤的可能作用机制，为临床治疗男性不育症寻找一种有效治疗法则及方药，并为强精片的进一步开发利用打下基础。
　　方法：
　　收集2015年1月到2015年12月就诊于成都中医药大学附属医院的男性不育患者，遴选出72例祖国医学辨证为肾虚血瘀型的患者，且女方无生殖机能异常。参照《人类精子学》（2013版）、《欧洲泌尿外科学会疾病诊断治疗指南》（2014版）、《人类精液检查与处理实验室手册》（WHO第五版，2009年）以及相关试剂盒说明书等制定西医诊断标准；并参照《中药新药临床研究指导原则》（2002版)、《中国中西医结合男科学》（张敏健、郭军主编，2011版)制定中医诊断标准，采取随机、对照的方法，将72例精子DNA完整性受损的男性不育症患者分为两组，两组各36例，试验组使用院内制剂“强精片”治疗，由成都中医药大学附属医院加工房提供，规格100片/瓶，每片0.3g。用法为每日3次，每次4片，饭后温水吞服，对照组使用五子衍宗丸治疗，由成都中医药大学附属医院提供(承德天原药业股份有限公司生产），每盒10袋，每袋6g。每次1袋，1日2次，饭后温水冲服。两组疗程均为3个月。通过检测受试者服药前后精子DNA碎片率(DNA fragmentation index,DFI)、活性氧自由基（reactiveoxygen spe-cies,ROS)、精楽过氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)的变化以及中医肾虚血瘀证候评分表来评价疗效。
　　实验数据用SAS(JMP9.0)软件包进行处理：数据分析时，满足正态分布的成组定量数据采用t检验，组间均数的比较用单因素方差分析，不满足正态分布，用非参数检验。率的比较用卡方检验，方差不齐采用秩和检验，各项指标结果用均数土标准差（x±s)表示，以P＜0.05有统计学意义。
　　结果：
　　1、通过对72例受试者年龄与DFI、ROS、SOD相关性线性分析，年龄与DFI线性拟合比率F=4.50，P＜0.0001，具有统计学意义，受试者年龄与DFI呈正相关；DFI与ROS线性拟合比率F=0.47，P＜0.0001，具有统计学意义，受试者ROS与DFI呈正相关;ROS与SOD线性拟合比率F=-7.86，P＜0.0001，具有统计学意义，ROS与SOD呈负相关。
　　2、试验组采用补肾活血法（强精片）治疗3个月，通过数据分析，其DFI平均值=10.95±4.55％，Z=9.2728，P=0.0045，P＜0.05，差异具有统计学意义。ROS平均值=13.74±8.88RLU/s，Z=4.20，P=0.0002，P＜0.05，差异具有显著的统计学差异。SOD平均值=28.01±11.18ng/ml，Z=7.19，P=0.0112，P＜0.05，差异具有统计学意义。
　　3、对照组采用五子衍宗丸治疗三个月，通过数据分析，DFI平均值=15.38±6.33%，Z=8.36，P＜0.0001，差异具有统计学意义。ROS平均值=20.37±12.65RLU/s,Z=3.21，P=0.0002，P＜0.05，差异具有显著的统计学意义。SOD平均值=20.20±6.25ng/ml,Z=6.98，P＜0.0001，差异具有显著的统计学意义。
　　4、试验组治疗前DFI平均值=25.24±9.76%，经过3个月的治疗后，试验组DFI平均值为10.95±4.55%，Z=9.2728，P=0.0045，P＜0.05，差异具有统计学意义，试验组DFI较治疗前显著下降。
　　5、试验组治疗前ROS平均值=41.46±19.28RLU/s，经3个月的治疗后，试验组治疗后ROS平均值为13.74±8.88RLU/s,Z=4.20，P=0.0002，P＜0.05，具有统计学意义。ROS平均值较治疗前有显著下降。
　　6、试验组治疗前SOD平均值=14.19±7.15ng/ml，治疗后ROS平均值为28.01±11.18ng/ml,Z=7.19，P=0.0112，P＜0.05，具有统计学意义。试验组SOD平均值较治疗前有显著提高。
　　7、试验组与对照组通过3个月治疗后，中医证候评分经统计学分析后，试验组临床控制5例，显效15例，有效8例，无效8例，总有效率77.78%;对照组临床控制3例，显效12例，有效9例，无效12例，总有效率66.67%。通过对总有效率的比较，总有效率P=0.0121，P＜0.05，具有统计学意义。说明试验组运用补肾活血法（强精片）可显著改善中医临床症状，且优于对照组。
　　结论：
　　1、年龄与不育患者精液中DFI含量具有相关性，随着年龄的增长，不育患者DFI升高；ROS随着DFI升高而升高，SOD含量随着ROS升高而呈下降趋势。
　　2、相比五子衍宗丸，“强精片”可显著降低男性不育症患者精液中精子DNA碎片率、活性氧自由基水平。
　　3、相比五子衍宗丸，“强精片”可显著提高男性不育症患者精浆过氧化物歧化酶活性。
　　4、“强精片”与五子衍宗丸相比，“强精片”可显著改善肾虚血瘀型不育患者的中医证候症状。

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引言

第一部分临床试验

1.研究方法

1 .1试验设计：随机、对照设计

1 .2样本含量

1 .3研究对象

1.4 治疗方法

1 .5检测方法、观察指标和疗效评价

1.6依从性评价

1. 7 安全性评价

1 .8统计方法

2. 试验结果与分析

2. 1 研究对象试验前基线分析结果

2. 2 研究对象试验前相关参数分析结果

2. 3 研究对象试验后相关参数分析结果

第二部分讨论

1. 中医理论中补肾活血法的认识

1. 1补肾活血法的中医基础理论阐述

1. 2现代医学运用补肾活血法治疗男性不育症疗效简介

2 .精子DNA完整性的认识

2 . 1精 子 DNA损伤机制

2 . 2精 子 DNA损伤表现形式及损伤程度评估指标

2 . 3 精 子 DNA损伤与男性不育的关系

2 . 4 精 子 DNA损伤的影响因素

2 . 5 精 子 DNA损伤的治疗

3. 精液氧化与抗氧化机制的认识

3. 1 氧化应激反应

3 . 2 活 性 氧 自 由 基 （R0S)

3 . 3 超 氧 化 物 歧 化 酶 （S0D)

3 .4男性生殖道抗氧化的防御机制

4.试验组选择药物_ 强精片的认识

4. 1 强精片的组成及方论

4 .2 强精片的前期研究基础

4 .3 强精片的研究结论

5. 对照组选择药物一五子衍宗丸的认识

5 .1 五子衍宗丸的组成及方论

5 .2 五子衍宗丸的现代药理研究

6 .补肾活血法（强精片）改善精子DNA损伤的作用机制探讨

结论

问题与展望

致谢

参考文献

附: 文献综述：近几年关于精子DNA完整性的研究进展

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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