左归丸、右归丸对体外培养星形胶质细胞的影响

摘要

目的：
　　通过细胞生物学技术，探讨分离、培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞的方法，观察补肾之经典方（左归丸、右归丸）对体外培养星形胶质细胞的影响。
　　方法：
　　1.选择雌、雄SD大鼠，灌胃给予不同浓度的左归丸、右归丸药液，腹主动脉采血制备含药血清；
　　2.选择SD乳鼠，分离大脑皮质得到星形胶质细胞，并传代培养、纯化、免疫组化法鉴定；
　　3.将不同浓度的左归丸、右归丸含药血清加入培养液中作用星形胶质细胞，用MTT法检测加药后12小时药物的毒性以及确定最佳加药时间（24h、48h、72h），并用ELISA法测定脑源性神经营养因子的含量，来说明不同浓度的左归丸、右归丸对体外培养星形胶质细胞的影响。
　　结果：
　　1.原代、传代培养并鉴定星形胶质细胞，P3代细胞的细胞生长形态、结构稳定，将其用于后续实验中。
　　2.不同浓度的左归丸、右归丸含药血清作用星形胶质细胞，在细胞毒性实验中,相差显微镜下观察到0.92g/ml组的细胞大量崩解死亡,0.46g/ml组细胞出现明显收缩，甚至坏死，表明药物血清在浓度较高时对细胞有明显毒性作用，根据MTT测试结果,发现细胞存活抑制浓度约为0.92g/ml、0.46g/ml；而较低浓度药物表现出促进细胞增殖的作用,且药物浓度为0.12g/ml、0.23g/ml的与对照组相比差异有显著性意义(P　　3.细胞增殖实验中的MTT测试结果表明,浓度(0.12g/ml、0.23g/ml)左归丸、右归丸含药血清作用星形胶质细胞24h、48h增殖有明显促进作用,与对照组相比，有统计学意义（PO.05）。
　　4.用ELISA法检测星形胶质细胞分泌的脑源性神经营养因子,发现浓度(0.12g/ml、0.23g/ml)药物作用于星形胶质细胞24h、48h时，脑源性神经营养因子的分泌量与对照组相比有差异（P　　结论：
　　不同浓度的左归丸、右归丸含药血清对体外星形胶质细胞有不同的作用，较高浓度（0.92g/ml、0.46g/ml）对星形胶质细胞产生毒性作用，使细胞裂解死亡，而较低浓度（0.12g/ml、0.23g/ml）对星形胶质细胞有促进增殖的作用。