平胃散对湿阻中焦证大鼠肝脏葡萄糖有氧氧化代谢系统影响的研究

摘要

实验目的：
　　探讨湿阻中焦证大鼠模型对肝脏葡萄糖有氧氧化代谢系统的影响。揭示湿阻中焦证细胞物质代谢和能量代谢失衡的部分分子机制和脾胃调控葡萄糖有氧氧化代谢系统方面的作用靶点及平胃散的干预作用。
　　实验方法：
　　采用前期成熟的湿阻中焦证造模方法，建立湿阻中焦证动物模型。选取间苯三酚法检测血清中D-木糖含量，化学比色法检测肝脏Na+-K+-ATP酶活性，过氧化物酶法检测血清中葡萄糖含量，化学方法检测肝脏组织中蛋白、丙酮酸激酶、丙酮酸含量；ELISA法检测肝脏组织中乙酰辅酶A、柠檬酸合酶、呼吸链复合体I、呼吸链复合体IV活力；微量法检测肝脏组织中a-酮戊二酸脱氢酶活力、异柠檬酸脱氢酶活力；高效液相色谱技术检测ATP、ADP含量；分光光度法检测NAD与NADH含量以及柠檬酸含量。
　　实验结果：
　　1.湿阻中焦证模型的建立
　　①通过一般情况观察，与空白组相比，模型组大鼠体重明显减轻，饮食减少，精神状态较差。
　　②客观指标检测，模型组大鼠胃排空迟缓，血清D-木糖含量下降，Na+-K+-ATP酶活力降低。
　　③经平胃散干预治疗后，模型组大鼠体重、精神状态，胃残留率、肠推进率、血清D-木糖吸收及Na+-K+-ATP酶活力均有所好转。湿阻中焦证模型大鼠造模成功。
　　2.湿阻中焦证对肝脏葡萄糖代谢胞液反应阶段相关因子的影响
　　造模后，与空白组相比，模型组大鼠血清中葡萄糖含量显著升高，肝脏组织中的丙酮酸激酶活力及丙酮酸含量有升高或升高趋势。与模型组相比，自然恢复组血清中葡萄糖含量降低，肝脏组织中的丙酮酸激酶活力及丙酮酸含量持续升高。平胃散干预后，大鼠血清中的葡萄糖含量升高明显，其中平胃散高剂量组高于空白组水平，大鼠肝脏组织中丙酮酸激酶活力及丙酮酸含量有升高趋势，二者变化方向一致且以平胃散低剂量升高最为明显。
　　3.湿阻中焦证对肝脏葡萄糖代谢线粒体反应阶段的影响
　　3.1.湿阻中焦证对乙酰辅酶A含量的影响
　　造模后，与空白组相比，模型组大鼠肝脏组织中乙酰辅酶A的含量呈现降低趋势，与模型组比较，自然恢复组乙酰辅酶A的含量仍降低，平胃散干预后，大鼠肝脏组织中乙酰辅酶A含量升高且与剂量大小呈负相关，其中平胃散低剂量组接近于空白组水平。
　　3.2.湿阻中焦证对三羧酸循环中关键酶及相关调节因子的影响
　　造模后，与空白组相比，模型组大鼠肝脏组织柠檬酸合酶，异柠檬酸脱氢酶，α-酮戊二酸脱氢酶，琥珀酸脱氢酶活力及柠檬酸含量均升高，α-酮戊二酸含量降低，与模型组比较，自然恢复组肝脏组织中柠檬酸合酶及琥珀酸脱氢酶活力降低，异柠檬酸脱氢酶，α-酮戊二酸脱氢酶活力及α酮戊二酸含量均升高，柠檬酸含量变化不大有降低趋势。平胃散干预后，大鼠肝脏组织柠檬酸合酶、α-酮戊二酸脱氢酶活性升高趋势，异柠檬酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶活性及α酮戊二酸含量降低，柠檬酸含量趋于稳定。
　　3.3.湿阻中焦证对氧化磷酸化过程中相关因子的影响
　　与空白组相比，模型组大鼠肝脏组织呼吸链复合体I、呼吸链复合体IV活力及ATP、NAD+和NADH含量均降低，ADP含量变化不明显趋于稳定。与模型组比较，自然恢复组大鼠肝脏组织中呼吸链复合体I、呼吸链复合体IV活性及NAD+和NADH含量均升高，ATP与ADP含量降低。平胃散干预后，大鼠肝脏组织呼吸链复合体I、呼吸链复合体IV活性及ATP、ADP、NAD+和NADH含量均升高。
　　实验结论：
　　湿阻中焦证模型可以影响肝脏葡萄糖有氧氧化代谢系统的部分相关因子，这可能是湿阻中焦致细胞物质代谢与能量代谢失衡的机制之一；平胃散能够改善湿阻模型肝脏葡萄糖有氧氧化代谢系统部分因子缺损状态，参与物质代谢和能量代谢输布调控，这可能是脾胃调控葡萄糖有氧氧化代谢系统方面的作用靶点及平胃散燥湿健脾的作用机制之一。

目录

中英文缩略词表

前言

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 造模材料

1.3 实验药物及制备

1.4 实验试剂

1.5试剂配置

1.6 实验仪器

2 实验方法

2.1 动物分组

2.2 造模方法及给药情况

2.3 标本采集与处理

2.4 一般情况观察

2.5 胃肠运动及吸收检测方法

2.6 制备肝脏组织匀浆液

2.7相关指标测定

2.8实验数据统计方法

3 实验结果

3.1 大鼠一般情况观察

3.2 大鼠体重、摄食量及饮水量变化

3.3 大鼠胃肠动力及吸收状况

3.4 大鼠肝脏中Na+-K+-ATP酶活性变化

3.5 湿阻中焦证对大鼠肝脏有氧酵解途径部分因子的影响及平胃散干预作用

3.6 湿阻中焦证对大鼠肝脏组织中乙酰辅酶A含量的影响及平胃散干预作用

3.7湿阻模型对三羧酸循环关键酶及相关因子的影响及平胃散干预作用

3.8湿阻模型对氧化磷酸化关键酶及相关因子的影响及平胃散干预作用

4 讨论

4.1相关理论性探讨

4.2实验探讨

结论

问题与展望

参考文献

附件

文献综述:肝脏糖代谢异生途径相关因子的调节机制

致谢

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果