野木瓜中黄酮和皂甙类化合物的分离提纯及其分析测试研究

摘要

中药有效成分的研究是中药现代化的关键，相关作用机制等基础性研究具有重要的理论和实际应用意义。中药的有效成份黄酮和皂甙类化合物具有多种多样的药理和生理活性，显示出广阔的应用前景。本文选择的研究对象一野木瓜中含有丰富的皂甙、糖、蛋白质、黄酮等，具有非常好的保健养颜功能。野木瓜提取物具有镇痛、镇静和解痉等作用，且毒副作用小；由本人制备的野木瓜提取物经试验证明具有抑制癌细胞生长的作用。然而，由于相关的基础研究开展得不够，因而一定程度上阻碍了其实际应用的开发。本文比较了几种野木瓜中有效成分的提取方法，并利用紫外光谱、高效液相色谱和循环伏安法等研究了提取物中有效成份的测试方法。 首先，比较了超声波提取法与传统的热回流提取法。实验结果表明，超声波提取法具有收率高，无需加热，大大缩短提取时间等优点。在优化的实验条件下，用超声波法提取野木瓜中的黄酮和皂甙类化合物，采用分光光度法测定野木瓜中总黄酮及总皂甙的含量，为野木瓜中药材在临床医学中的进一步开发利用提供了实验技术。 其次，采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)与紫外光谱联用的分析方法，在优化的分析条件下，测定了野木瓜中齐墩果酸的含量，并对该方法的重现性做了考察。在超声波提取的基础上，采用有机溶剂萃取法，对野木瓜提取物进行进一步的分离纯化。HPLC与紫外检测器联用提供了各萃取物的紫外光谱信息，初步探讨了提取物的定性分析测试技术，并采用循环伏安法研究了野木瓜乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物的乙醇溶液在玻碳电极上的电化学行为。实验结果表明，两萃取物在玻碳电极上的电极反应均有质子参与，是一个受吸附和扩散同时控制的准可逆过程，为建立快速、简便的电分析测试技术作了有益的探索。并结合微分脉冲伏安法的测试结果，探讨了两萃取物的抗氧化性。 最后，应用MTT还原比色法观察野木瓜提取物对人类红白血病细胞系K562细胞生长增殖的影响作用，并对其中的主要有效成分进行了初步的分析。

目录

文摘

英文文摘

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第一章绪论

1.1中草药研究进展

1.1.1中草药有效成分简介

1.1.2中草药提取工艺研究现状

1.1.3中草药有效成分的分析测定

1.2野木瓜的有效成份及其药理研究

1.3本论文的研究意义及主要研究内容

1.3.1研究意义

1.3.2主要研究内容

第二章野木瓜中总黄酮的提取工艺及其测定方法的研究

2.1实验仪器

2.2所需主要试剂

2.3野木瓜中黄酮类化合物提取工艺的研究及总黄酮的测定

2.3.1样品及标准溶液的制备

2.3.2紫外分光光度法测定样品中的总黄酮含量

2.3.3超声波法提取条件的考察

2.4小结

第三章野木瓜中皂甙类化合物的提取及其分析测定

3.1实验仪器

3.2主要实验用试剂

3.3野木瓜中总皂甙的测定方法

3.3.1样品及标准溶液的制备

3.3.2分光光度法分析测试操作步骤

3.3.3结果与讨论

3.3.4 小结

3.4高效液相色谱法测定野木瓜中齐墩果酸的含量

3.4.1色谱条件

3.4.2样品溶液的制备

3.4.3实验结果与讨论

第四章野木瓜中活性物质的电化学行为研究

4.1实验仪器

4.2所需主要试剂

4.3实验方法

4.3.1样品的制备

4.3.2紫外光谱分析

4.3.3 HPLC测定

4.3.4电化学测量

4.4结果与讨论

4.4.1野木瓜萃取物的紫外光谱及高效液相色谱的表征

4.4.2野木瓜乙酸乙酯萃取物的电化学研究

4.4.3野木瓜正丁醇萃取物的电化学研究

4.4.4野木瓜萃取物的抗氧化性

第五章野木瓜抗癌活性的初步探讨

5.1实验药物与试剂

5.2仪器设备

5.3实验方法

5.3.1野木瓜提取物的制备

5.3.2 K562细胞传代培养

5.3.3 MTT比色法测定三种野木瓜提取物对K562细胞增殖的影响

5.4实验结果与讨论

5.4.1野木瓜提取物的紫外光谱分析

5.4.2野木瓜提取物抗癌活性的研究

5.5 小结

参考文献

研究生期间的科研成果

致谢