双水相胶束系统从大肠杆菌细胞内释放与分离L-天冬酰胺酶

摘要

L-天冬酰胺酶(EC3.5.1.1)是治疗白血病的有效药物,普遍应用于临床.该文利用表面活性剂和磷酸盐组成的双水相胶束系统释放与分离大肠杆菌胞内酶L-天冬酰胺酶,将释放与纯化步骤有效地结合起来.该文采用非离子型表面活性剂TritonX-100和K<,2>HPO<,4>组成的双水相胶束系统从EscherichiacoliATCC11303细胞内释放L-天冬酰胺酶.研究了释放时间、TritonX-100浓度、K<,2>HPO<,4>浓度、溶液pH值、温度对酶释放和分离效果的影响.在适当的条件下,70﹪以上的L-天冬酰胺酶被释放到胞外,并且基本上集中在下相.初步探讨了双水相胶束系统释放酶的机理.研究了表面活性剂浓度、磷酸盐浓度和pH对浊点的影响规律.发现浊点随表面活性剂浓度的变化而改变,浊点与磷酸盐浓度呈线性关系,与pH呈阶梯状变化.制作了TritonX-100/K<,2>HPO<,4>双水相胶束系统的相图.使用过的表面活性剂可以不经处理重复使用几次,并不降低释放效果.实验表明,这样的双水相胶束系统是温和有效的释放和分离胞内酶的体系.

目录

文摘

英文文摘

1文献综述

1.1L-天冬酰胺酶简介

1.2L-天冬酰胺酶的生产和分离纯化

1.3双水相萃取技术

1.4双水相胶束萃取分离技术

2实验仪器、材料与方法

2.1主要仪器

2.2主要试剂和材料

2.3实验菌种

2.4实验方法

2.4.1L-天冬酰胺酶产生菌(E.coli ATCC 11303)的摇瓶培养和菌悬液制备

2.4.2表面活性剂Triton X-100/磷酸盐双水相胶束系统释放和分配大肠杆菌细胞内的L-天冬酰胺酶

2.4.3L-天冬酰胺酶活力的测定(氨电极法)

2.4.4表面活性剂Triton X-100浊点的测定

2.4.5Triton X-100/K2HPO4双水相胶束系统相图的制作

2.4.6表面活性剂Triton X-100的重复使用

3结果与讨论

3.1L-天冬酰胺酶产生菌的摇瓶培养

3.2各种因素对Triton X-100/K2HPO4双水相胶束系统释放和分配L-天冬酰胺酶的影响

3.2.1Triton X-100/K2HPO4双水相胶束系统释放大肠杆菌细胞内L-天冬酰胺酶的时间过程

3.2.2Triton X-100浓度对双水相胶束系统释放和分配L-天冬酰胺酶的影响

3.2.3K2HPO4浓度对双水相胶束系统释放和分配L-天冬酰胺酶的影响

3.2.4PH对双水相胶束系统释放和分配L-天冬酰胺酶的影响

3.2.5温度对双水相胶束系统释放和分配L-天冬酰胺酶的影响

3.3表面活性剂Triton X-100浊点的测定

3.3.1Triton X-100浓度对浊点的影响

3.3.2K2HPO4测试对浊点的影响

3.3.3PH对浊点的影响

3.4Triton X-100/K2HPO4双水相胶束系统的相图

3.5Triton X-100的重复使用

3.6结论

参考文献

致谢