逆转录病毒载体介导凋亡抑制基因XIAP沉默在前列腺癌治疗的实验研究

摘要

本文首先应用RT-PCR检测前列腺癌组织、正常前列腺组织和前列腺癌细胞株PC-3，DU-145，LNCaP细胞XIAP基因的表达，并通过免疫组化SP法检测56例前列腺癌组织标本XIAP蛋白的表达情况，研究XIAP表达与前列腺癌临床病理特征的关系。RT-PCR结果显示XIAP基因在前列腺癌组织和前列腺癌细胞株PC-3，DU-145，LNCaP细胞高表达，正常前列腺组织无表达。在前列腺癌组织和癌旁组织中，XIAP蛋白阳性检出率分别为53.6％(30/56)和21.5％(12/56)(P＜0.01)；不同分期、分级组XIAP阳性检出率相比差异无显著性(P＞0.05)。研究结果显示凋亡抑制基因XIAP与前列腺癌相关，在前列腺癌发生过程中具有重要的作用，有可能成为前列腺癌治疗的靶标 基于XIAP基因在前列腺癌发生中的重要作用，进一步利用RNA干扰技术，根据siRNA设计原则和XIAP基因全长序列特征，采用pSUPER-retroRNAi系统，利用基因工程技术构建表达XIAPshRNA的重组逆转录病毒载体，感染DU-145细胞下调XIAP的表达，并观察其对DU-145细胞凋亡的影响。表达XIAPshRNA的重组逆转录病毒载体鉴定后用阳离子聚合物jetPEI转染包装细胞系PheonixAmpho进行包装，嘌呤霉素筛选、扩增后PCR鉴定XIAP基因片段成功插入包装细胞，收集病毒上清体外感染DU-145，48h后Westernblot检测XIAP基因表达情况并观察其对DU-145细胞增殖、凋亡的影响。Westernblot结果显示重组逆转录病毒感染DU-14548h后，与对照组相比XIAP表达显著下调达85％；病毒感染96h后，pSUPER.Retro/XIAP组和对照组细胞凋亡率分别为33.02％和4.38％，明显高于对照组(P＜0.01)。研究结果表明构建的表达XIAPshRNA的重组逆转录病毒载体能显著下调前列腺癌细胞DU-145中XIAP的表达，抑制DU-145的生长、增殖并促使其凋亡。

目录

前言

文献综述：靶向凋亡抑制基因(XIAP)在前列腺癌治疗的研究进展

第一部分：凋亡抑制基因XIAP在前列腺癌细胞中的表达及与临床病理特征的关系

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

第二部分：表达凋亡抑制基因XIAP shRNA逆转录病毒载体的构建及鉴定

实验材料

实验方法

结果

讨论

第三部分：凋亡抑制基因XIAP shRNA对前列腺癌细胞系增殖、凋亡的影响

实验材料

结果

讨论

小结

参考文献

缩略语表

个人简历

致谢