儿童肺炎链球菌对大环内酯类耐药机制和分子流行病学研究

摘要

背景：肺炎链球菌是儿童社区获得性感染的重要致病菌。该菌对抗菌药物的耐药问题受到世界各国学者关注。近年来大环内酯耐药肺炎链球菌（MRSP）在世界范围内广泛传播，以亚洲国家和地区的肺炎链球菌对大环内酯类耐药最为严重，且表现出对四环素、复方磺胺、氯霉素、青霉素等的多重耐药。在我国，肺炎链球菌对大环内酯类的耐药远超过对青霉素的耐药，对大环内酯类耐药的肺炎链球菌的出现给青霉素过敏或耐药的肺炎链球菌感染患者的治疗带来极大困难。 目的： 通过对上海地区儿童MRSP的耐药表型、基因型的检测及分子流行病学分析，掌握本地区肺炎链球菌耐药的现状和趋势，分析上海地区儿童MRSP的主要耐药机制，了解接合性转座子Tn1545流行情况、MRSP的分子流行病学特征及与国际流行克隆株的相关性。为有效治疗肺炎链球菌感染和控制肺炎链球菌的耐药性提供理论依据。 方法： 采用E- test试验和K-B 纸片扩散法检测391株耐药肺炎链球菌对11种抗菌药物的敏感性；用双纸片法确定188株红霉素耐药的肺炎链球菌的耐药表型，PCR扩增检测其ermB、mefA、mefE、tetM和Tn1545-Tn916家族转座子整合酶基因intTn。采用PFGE和BOX-PCR方法分别对107株MRSP和47株MRSP进行同源性分析，血清分型6株临床分离多重耐药MRSP。 结果： 1、391株肺炎链球菌对红霉素的耐药率持续保持80％以上水平，且四年间MIC50和MIC90均≥256mg/L；98％红霉素耐药株为多重耐药，耐药模式以红霉素/四环素/复方磺胺甲噁唑/克林霉素和红霉素/四环素/复方磺胺甲噁唑/克林霉素/氯霉素为主，占48.7％（171/358）。青霉素不敏感率从2001年的41％上升到2004年61％。克林霉素的耐药率维持在10％左右；左氧氟沙星、头孢曲松和阿莫西林/克拉维酸对肺炎链球菌仍具有较好的敏感性。 2、188株红霉素耐药株中耐药基因ermB总检出率最高为91.5％（172/188），mefE 总检出率为38.3％（72/188），未检出mefA基因。四环素耐药基因tetM和转座子整合酶基因intTn的检出率一致为97.9％（184/188）。耐药基因组合以ermB(+)mefE(-)和ermB(+)mef(+)为主，占91.5％（172/188），二者均呈cMLSB耐药表型。ermB(-)mefE(+)占8.5％（16/188），耐药表型为M型。mefE检出率呈逐年增加趋势，2001年~2004年检出率分别为18.8％、10.8％、36.7％、52.8％。 3、107株MRSP共有60个PFGE型，其中，有6种PFGE型≥3株，这6种型共含53株细菌，占总株数49.5％，（53/107）。2003年~2004年ermB和mefE阳性菌株中存在与国际流行株密切相关的流行克隆P5型（39.2％，20/51）。 结论： 儿童中肺炎链球菌的耐药状况严峻，多重耐药常见。肺炎链球菌对大环内酯类耐药以cMLSB表型为主，由ermB基因或ermB和mefE基因共同介导；大环内酯外排基因有流行趋势，但仅限于起源于肺炎链球菌的mefE；转座子可能在本地区肺炎链球菌耐药基因的传播中起重要作用。耐药菌株的克隆传播是2004年上海地区儿童MRSP流行的重要因素，PFGE结果提示2003~2004年ermB和mefE同时阳性菌株的快速增加可能与国际流行株克隆播散有关。