质粒AmpC酶的流行分布及CMY-2型质粒AmpC酶的研究

摘要

目的：调查上海交通大学附属第六人民医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌中质粒AmpC酶的流行分布。研究本医院产CMY-2型质粒AmpC酶菌株的多重耐药特点。 方法： ①对1935株细菌采用标准纸片扩散法、三维试验筛选AmpC酶；多重PCR确认质粒AmpC酶；RAPD分析流行病学特点，纸片法检测合并ESBL的情况。 ②对第一部分实验中确认为产CIT群质粒AmpC酶的菌株进行PCR、克隆、测序；接合试验证实耐药基因的可传递性；微量稀释法测定MIC；PCR及测序确定ESBL的基因型；等电聚焦电泳检测细菌β-内酰胺酶等电点。 结果： ①1935株细菌中，54株(2.79％)产质粒AmpC酶，其中41株为DHA群，13株为CIT群。 ②大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌中的阳性率分别为1.91％、4.29％、3.03％。 ③RAPD结果显示我院的产质粒AmpC酶细菌以非克隆传播为主。 ④产质粒AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别有78.3％ (18/23) 和62％ (18/29)同时产ESBL。 ⑤PCR、测序及IEF结果表明，13株CIT群细菌所携带AmpC酶基因均为blaCMY-2(pI9.0)，且均携带blaTEM-1(pI5.4)，9株同时携带blaCTX-M-14(pI8.0)，无菌株携带blaSHV-like；pI5.4, 8.0的酶受克拉维酸抑制而不受氯唑西林抑制，pI9.0的酶受氯唑西林抑制而不受克拉维酸抑制； ⑥13株CIT群细菌有四株接合实验阳性，经PCR证实接合子均携带blaCMY-2，并有一株同时传递了blaCTX-M-14。 ⑦多数产CMY-2型酶的细菌呈多重耐药，并有一株菌对碳青霉烯类药物耐药。 结论： ①我院质粒AmpC酶的阳性率为2.79％；以DHA-1型质粒AmpC酶及产DHA-1的肺炎克雷伯菌为主；以非克隆传播为主； ②首次在上海地区发现CMY-2型质粒AmpC酶； ③质粒AmpC酶合并ESBL的阳性率较高，CMY-2型质粒AmpC酶主要和CTX-M-14型ESBL同时存在。 ④产质粒AmpC酶细菌耐药情况严重.