黄瓜CsMAPK基因的植物病毒载体构建及长春花种质资源多样性分析

摘要

本文利用简并引物PCR和RACE 技术，从黄瓜中克隆到CsMAPKcDNA的保守序列，运用NCBI 中Blastx 进行氨基酸同源比对结果表明，克隆的这个保守区序列与其他植物的MAPK基因有很高的同源性（>80％），其中与拟南芥ATMPK20基因同源性最高（90％）。同源性比对结果表明已成功克隆到了黄瓜CsMAPK 保守序列。另外，利用软件做出的一个保守区同源进化树，同样说明克隆到了黄瓜CsMAPK 保守序列。 为进一步验证该序列的功能，基于病毒诱导基因沉默的原理，将构建烟草花叶病毒载体，建立黄瓜RNA 干扰体系，对该基因进行功能验证。 由于长春花具有很强的观赏价值，开花时期长，品种多样，花色鲜艳，将广泛应用于2010年上海市世博会。本文利用分子标记分析了长春花种质资源遗传多样性，为长春花的遗传育种研究提供一定参考。 本论文优化了长春花ISSR-PCR 体系，并利用ISSR 分子标记技术对40个长春花种质资源进行了遗传关系分析，多态性PCR 扩增结果表明：在115个位点，其中多态位点78个，多态位点百分率为67.8％，多态性较高；POPGENE32软件计算结果表明，40个长春花品种平均有效等位基因数为1.6384，Nei 遗传多样性指数平均为0.3735，平均Shannon 信息指数为0.5546；应用NCSYS软件计算得到品种间的遗传相似系数介于0.150～0.900，平均为0.584。通过聚类分析将这40个长春花种质分成7组，该聚类结果与以前根据形态进行的分类结果有极大的相似性。该研究将为长春花品种鉴定和品种保护提供依据，为长春花种质资源亲缘关系的确定及杂交育种提供理论依据。