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论文说明:缩略语及中英文对照表
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第一章绪论
1.1肝脏再生研究进展
1.1.1普罗米修斯的传说
1.1.2肝脏再生
1.1.3从分子生物学角度理解肝脏再生
1.1.4肝脏再生机理认识
1.1.5小结
1.2蛋白质相互作用研究概述
1.2.1酿酒酵母生活史
1.2.2酵母双杂交系统的基本原理
1.2.3酵母双杂交系统的改进
1.2.4酵母双杂交系统的优点
1.2.5酵母双杂交系统的缺陷及相应对策
1.2.6酵母双杂交系统的应用
1.2.7小结
1.3大规模蛋白质相互作用研究的现状及局限性
1.4本论文的研究目的、内容和意义
第二章材料与方法
2.1质粒、载体、菌株、细胞株和抗体
2.2仪器设备
2.3 DNA相关实验方法
2.3.1聚合酶链式反应
2.3.2琼脂糖电泳
2.3.3酶切试验
2.3.4载体、片段凝胶回收试剂盒回收
2.3.5载体、片段的PCR产物片段试剂盒回收
2.3.6连接试验
2.3.7质粒构建方法
2.3.8转化试验
2.3.9质粒抽提
2.4细菌试验方法
2.4.1培养基配制
2.4.2感受态大肠杆菌制备
2.4.3菌种的保存方法
2.5蛋白相关实验
2.5.1蛋白表达方法
2.5.2蛋白检测-SDS-PAGE电泳
2.5.3 Western Blot
2.5.4蛋白抽提及复性
2.5.5蛋白纯化
2.5.6 GST Pull-down assay
2.5.7免疫共沉淀(Co-IP assay)
2.6酵母试验方法
2.6.1培养基配制
2.6.2醋酸锂介导的酵母转化方法
2.6.3酵母杂交
2.6.4酵母表型筛选
2.6.5 β-半乳糖苷酶活性测定
2.6.6酵母质粒提取
2.6.7 cDNA文库的操作
2.6.8筛cDNA文库
2.7细胞试验材料和方法
2.7.1胎牛血清的处理
2.7.2细胞DMEM/RPMI 1640培养基配制
2.7.3细胞复苏
2.7.4细胞换液
2.7.5细胞传代
2.7.6细胞保种
2.7.7细胞计数
2.7.8细胞转染
2.7.9细胞裂解方法(以100cm培养皿为例)
第三章结果与讨论
3.1肝脏再生转录因子互作网络的绘制
3.1.1前言
3.1.2转录因子挑选结果
3.1.3亚克隆
3.1.4自激活的测试结果
3.1.5杂交菌种的准备
3.1.6矩阵杂交
3.1.7小结
3.1.8讨论
3.2网络质量的验证
3.2.1前言
3.2.2文献查阅验证
3.2.3 Bait和Prey融合标签蛋白的原核表达
3.2.4 Bait和Prey融合标签蛋白的真核表达结果
3.2.5 β-半乳糖苷酶活性测定
3.2.6部分重要相互作用的β-半乳糖苷酶活性的测定
3.2.7互作网络的作图
3.2.8小结
3.2.9讨论
3.3相互作用网络作用分析
3.3.1前言
3.3.2 FHL2/ATF3互作的意义
3.3.3 FHL2/STAT3互作的意义
3.3.4网络的整体作用分析
3.3.5小结
3.3.6讨论
3.4.肝脏再生调控转录因子互作网络的后期研究
3.4.1前言
3.4.2缺失突变体的Y2H载体构建
3.4.3作用位点的查找
3.4.4根据β-半乳糖苷活性寻找各种突变体作用部位
3.4.5 cDNA文库筛选
3.4.6小结
3.4.7讨论
3.5展望
第四章结论
4.1论文创新点
4.2论文取得的成果
参考文献
附录
致谢