儿童急性髓细胞性白血病的预后相关因素研究

摘要

目的：通过检测儿童急性髓细胞性白血病(AML)患者的NPM1基因突变，大剂量阿糖胞苷化疗后Ara-c及其代谢物阿糖尿苷的血浓度以及白血病细胞的免疫标记，研究疾病本身因素和宿主因素两方面对儿童AML的预后影响。 方法：①构建NPM1 cDNA 片段的野生型和突变型质粒,分别建立野生型和突变型的PCR扩增标准曲线，然后通过HRM-PCR和HRM分析检出70例AML样本中NPM1基因突变情况。分析NPM1基因突变和儿童急性髓细胞性白血病患者临床表现和预后间的关系。②采用高效液相色谱法测定32例AML患儿Ara-c，Ara-u的血浓度，并进行预后分析。③采用流式细胞术测定101例AML患儿的免疫表型，结合临床资料进行预后分析。 结果：⑴经测序分析证实HRM法能高灵敏度、高特异性地检测NPM1基因突变。本组研究病例中，NPM1基因突变阳性率45.7％。NPM1突变组和NPM1 野生组在临床各项指标上（如性别、年龄、外周血白细胞数、乳酸脱氢酶、血清铁蛋白、骨髓肿瘤细胞比例等）的差异不大，但外周血小板数有差异；NPM1突变组的第一疗程缓解率（81.3％）、5年无事件生存率EFS（64.4％），5年总生存率OS（63.1％）相对较高，但未发现统计学有显著性差异，故有待进一步扩大样本后继续研究。⑵大剂量Ara-c化疗时血药高峰浓度平均为39.46±15.13umol/L，Ara-u血浓度平均为258.23±58.23 umol/L。32例患儿中共有12例复发，20例长期生存组中120min时Ara-c血浓度平均为42.65±17.27 umol/L，复发组为34.15±8.96 umol/L，两组比较P值0.126。相应Ara-u 浓度长期生存组261.12±59.60 umol/L，复发组253.42±58.13umol/L，两组比较P值0.723。⑶CD34阴性组以及CD34和HLA-DR 同时阴性组一疗程CR 率均明显高于非阴性组，差异有统计学意义（P=0.008，0.000）；从EFS来看，CD34阴性组，HLA-DR阴性组以及CD34和HLA-DR同时阴性组均明显高于非阴性组，差异有统计学意义（P=0.004，0.006，0.04），而CD14，CD15，CD7，CD19 差异对CR和EFS均无统计学意义。 结论：①HRM法能高灵敏度、高特异性地检测NPM1基因突变。NPM1突变组和NPM1野生组在临床各项指标上的差异不大，NPM1突变组的第一疗程缓解率、5年EFS、5年OS相对较高，但未发现显著性差异。②Ara-c、Ara-u血浓度个体差异较大和预后无明显相关。③免疫表型对AML患儿预后判断有一定帮助。