内质网蛋白57(ERp57)调节大鼠精卵融合过程的研究

摘要

哺乳类动物卵母细胞成熟是卵泡发生过程中的重要步骤，通常指卵母细胞恢复减数分裂以及进一步发育到第二次减数分裂的过程。在此过程中，卵细胞内某些蛋白的表达与分布呈现时空特异性，在卵泡发生、受精和胚胎植入等方面发挥着重要的作用。在前期研究中，我们首次发现了内质网蛋白57（endoplasmic reticulum protein 57，ERp57）在大鼠卵母细胞中表达，且其含量随着卵母细胞的成熟而增高。ERp57属于蛋白二硫键异构酶(protein disulfide isomerase，PDI)家族成员的一员，近期有文献报道该蛋白也存在于小鼠精子膜上，可能参与精卵的融合过程但与小鼠卵细胞无关，因此，我们设想，ERp57是否为大鼠精子和卵细胞共同拥有？如成立的话，大鼠精子和卵细胞是否又同时参与了精卵的融合过程？
　　 根据上述设想，我们选用SD大鼠作为实验动物，首先在原核生物中成功克隆表达了大鼠重组ERp57，并经纯化后免疫家兔制备出相应抗重组ERp57的多克隆抗体。其次，运用商品化的ERp57抗体和自制的抗rERp57抗体,通过间接免疫荧光组织化学及蛋白免疫印迹技术研究发现，大鼠成熟精子和卵细胞都存在ERp57蛋白。ERp57主要定位于附睾尾部精子的顶体部位、顶体反应后定位于精子的赤道区，而卵母细胞则定位在细胞表面。第三，运用自制的抗rERp57抗体检测ERp57对精子穿卵实验的影响，结果发现：该多克隆抗体能够显著抑制大鼠去透明带卵细胞的受精率（Fertilization Rate，FR）和受精指数（Fertilization Index，FI）（p<0.05,或p<0.01），但对精子运动参数和顶体反应无明显影响（p>0.05）,推测ERp57可能参与了SD大鼠精卵细胞的融合过程。最后，我们成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/myc-His-ERp57，将其稳定转入中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中表达，这将为进一步探索ERp57在哺乳动物生殖过程中的作用机制奠定必要的基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

引 言

第一章 大鼠ERp57基因的原核表达及其抗体的制备

第二章 重组ERp57蛋白的鉴定、定位和功能研究

第三章 大鼠ERp57基因真核表达载体的构建及表达

第四章 结 论

参考文献

附 录 雄性生殖中热休克蛋白作用的研究进展

致 谢

攻读学位期间发表和待发表的学术论文及综述