iPS细胞分化残留研究及小鼠体内全能性干细胞的追踪

摘要

目的： 本课题旨在探讨Ips细胞在体内外分化过程中是否存在分化残留现象，并试图在小鼠胚胎发育过程及成体组织中分离培养得到全能性干细胞，为干细胞分化残留理论提供事实证据，拓宽干细胞治疗的种子细胞来源。
　　 方法：⑴Ips细胞通过类胚体(embryoid bodies，Ebs)体外分化，分化20天的拟胚体酶消化后在常规Ips细胞培养条件下培养，获得扩增细胞，鉴定扩增细胞的表型和分化能力。⑵将Ips细胞注射到裸鼠皮下，体内分化形成畸胎瘤，再将畸胎瘤消化后在常规Ips细胞培养条件下培养，获得扩增细胞，鉴定扩增细胞的表型和分化能力。⑶分析PECAM-1、SSEA-1在小鼠胚胎，新生鼠，成体骨髓、睾丸组织中的表达，并以次分选细胞，在小鼠胚胎干细胞常规培养条件下培养，以期获得全能性干细胞。
　　 结果：①Ips细胞通过Ebs分化20天后消化打散，用常规Ips细胞培养条件培养，可以扩增获得Ips样细胞。扩增的细胞在体外可再次分化形成Ebs，从再次分化20天的Ebs中仍可培养获得Ips样细胞。将扩增的细胞注射到裸鼠皮下能形成畸胎瘤，瘤体组织中存在成熟的内胚层、中胚层和外胚层组织。②Ips细胞注射到裸鼠皮下分化6-8周后形成畸胎瘤，将畸胎瘤消化打散后常规Ips细胞培养条件下培养，可以扩增出Ips样细胞。它们与原始的Ips细胞形态、增殖能力、多潜能标志物表达一致，移植到小鼠皮下后，可以再次分化形成畸胎瘤，瘤体组织中存在成熟的内胚层、中胚层和外胚层组织。再次形成的畸胎瘤重新消化培养后可以再次得到Ips样细胞。③在小鼠胚胎，新生鼠，成体鼠骨髓、睾丸中PECAM-1, SSEA-1均有一定程度的表达。上述组织直接培养或者分选PECAM-1+SSEA-1+培养，均未能获得长期传代的细胞。
　　 结论：⑴Ips细胞在体外Ebs分化后存在残留现象。残留未分化细胞的特性与原始Ips细胞一致。残留细胞可再次分化并仍有残留现象存在。⑵Ips细胞在体内畸胎瘤分化中也存在残留现象。残留未分化细胞的特性与原始Ips细胞一致。残留细胞可再次形成畸胎瘤并仍存在分化残留现象。⑶PECAM-1、SSEA-1在小鼠胚胎及成体组织中都有一定程度的表达，以此为分子标记从小鼠不同组织中分离培养全能性干细胞有待进一步研究。

目录

一 绪论

第一部分

第二部分

全文结论

三 参考文献

四 致谢

五 附录

六 综述多潜能干细胞的研究进展

论文说明:Abbreviation

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