脊髓代谢型谷氨酸5受体参与吗啡耐受的信号机制研究

摘要

目的：探讨脊髓代谢型谷氨酸5 受体（Metabotropic glutamatereceptor subtype 5，mGluR5）参与鞘内吗啡耐受的机制，评价脊髓蛋白激酶C（Protein Kinase C，PKC）、磷脂酶C（Phospholipase C，PLC）和G 蛋白亚型（Gαi、Gαo、Gαq 及Gβ）表达在其中的作用。
　　 方法：⑴制作大鼠鞘内置管模型， 56 只雄性SD 大鼠（Sprague-Dawley rats，SD rats），体重180-240g，随机分为7 组（n=8）：对照组（S1 组， S2 组）、反义链组（ANT 组），错义链组（MIS 组），吗啡耐受组（M 组），反义链吗啡合用组（AM 组）和错义链吗啡合用组（MM 组）。采用鞘内给药方式注射寡聚核苷酸、吗啡和生理盐水。以5μl含30nmol 的寡聚核苷酸（ANT 组，MIS 组，AM 组和MM 组）或0.9％生理盐水（S 组和M 组）每日给药2 次，连续5 天。M 组、AM 组和MM 组大鼠于D6 天起连续3 天每日加用吗啡2 次，每次15μg，S2 组以5μl 0.9％生理盐水代替。于D1、D3、D5、D6-8 每天测定一次各组大鼠热痛阈和机械痛阈。⑵于D6 天取S1 组、ANT 组和MIS 组大鼠L4-5脊髓行real-time PCR 及western blot，观察mGluR5 mRNA 和蛋白的表达。于D9 天时获取S2 组、AM 组、MM 组及M 组大鼠L4-5 脊髓，经real-timePCR 检测各组大鼠腰段脊髓PKCα、PKCγ、PKCε、PLCβ3 mRNA 的表达，并运用western blot 技术定量mGluR5、PKCα、PKCγ、PKCε、PLCβ3蛋白的表达水平；⑶采用western blot 定量各组大鼠腰段脊髓中Gαi、Gαo、Gαq 及Gβ 蛋白的表达水平。
　　 结果：①与S1组相比，ANT 组及MIS 组大鼠在D1-5 天热痛阈和机械痛阈均无统计学差异，证明寡聚核苷酸预处理五天对大鼠痛阈无影响；与S2 组比较，M 组、MM 组、AM 组均在D6-7 天时显示热痛阈和机械痛阈增高，展示了吗啡良好的镇痛作用。D8 天时M 组和MM 组大鼠发生吗啡耐受，MPE％与S2 组比较无统计学差异（P>0.05），而AM组大鼠MPE％在D8 天仍高于S2 组，有统计学意义（P<0.01）。与M 组比较，AM 组从D7 天起大鼠热痛阈和机械痛阈增高，有统计学意义（P<0.05）。②Real-time PCR 结果显示，ANT 组中mGluR5 含量比S1组下降48.2％（P<0.05），MIS 组无此效果。Western blot 显示，ANT 组mGluR5 蛋白表达量比S1 组下降约54.7％（P<0.05）。③M组和MM组脊髓PKCα、PKCγ、PKCε、及PLCβ3 的mRNA 表达上调（P<0.05，与S2 组相比）。Western Blot 显示脊髓M 组和MM 组mGluR5、PKCα、PKCγ、PKCε、PLCβ3 的表达上调（P<0.05，与S2 组相比），AM 组脊髓mGluR5、PKCα、PKCγ、PKCε、PLCβ3 的表达下调（P<0.05，与M 组相比）。（4）Western Blot 显示M 组和MM 组脊髓Gαi、Gαo、Gαq 及Gβ表达上调（P<0.05，与S2 组相比）；AM 组脊髓Gαi、Gαo、Gαq 及Gβ表达下调（P<0.05，与M 组相比）。
　　 结论：⑴大鼠鞘内吗啡耐受发生后，腰段脊髓mGluR5 被大量激活，且脊髓内PKCα、PKCγ、PKCε、PLCβ3、Gαi、Gαo、Gαq 及Gβ 表达增高。⑵mGluR5 的反义寡聚核苷酸能增强吗啡的镇痛作用，并延缓吗啡耐受的发生，并抑制耐受时脊髓内PKCα、PKCγ、PKCε、PLCβ3、Gαi、Gαo、Gαq 及Gβ 表达增高。⑶mGluR5可能是通过影响PKC 转位激活及与μ-阿片受体偶联的G蛋白信号改变来参与吗啡耐受的发生。

目录

前 言

第一章 mGluR5反义寡聚核苷酸作用的确定

第二章 mGluR5参与吗啡耐受的信号机制研究

全 文 结 论

综 述阿片受体与吗啡镇痛耐受

致谢

攻读硕士学位期间已发表论文及所获奖励

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