mir-301a促进胃癌发生发展及其作用机制的研究

摘要

[目的]胃癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一，并且以进展期胃痛为主。外科手术是目前治疗胃痛的有效手段，但进展期胃癌患者的术后5年生存率较差。以上根本原因在于胃癌的发病机制未明。miRNA是一类新近发现的内源性非编码小分子RNA，它们不仅调控众多正常的生理功能，而且在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。由于miRNA在胃痛中的作用尚未被完伞阐明，我们通过微阵列技术筛选出一系列在胃痛与正常对照差异表达的miRNA，而miR-301a是其中差异最显著的之一。本课题主要目的在于探讨miR-301a在胃癌中的表达和功能，并探索其调控机制。
　　[材料与方法](1)应用qRT-PCR对前期microRNA微阵列筛选出的miR-301a在九株胃痛细胞株与永生化胃黏膜细胞GES-1和正常胃黏膜组织中的表达水平进行验证，检测其在51对配对的胃癌肿瘤组织与痛旁组织中的表达水平，并进一步分析胃癌组织中miR-301a表达水平与胃痛临床病理特征之间的关系;(2)采用miR-301amimics与miR-301a逆转录病毒表达载体上调胃癌细胞株SGC-7901中miR-301a的表达水平，以及miR-301ainhibitors下调该细胞株miR-301a的表达水平，观察其对胃癌细胞生物学行为的影响;(3)生物信息学预测靶基因，然后结合3'UTR双荧光素酶报告系统检测，qRT-PCR和免疫印迹的方法，筛选并验证miR-301a作用的靶基因，初步明确miR-301a的发挥生物学功能的分子机制。
　　[结果]qRT-PCR检测结果显示，miR-301a在胃癌细胞株中的表达水平明显高于其在GES-1和正常胃黏膜组织中的表达水平，与microRNA微阵列中的检测结果趋势相一致。miR-301a在51例胃痛组织中的平均表达水平显著高于其配对癌旁组织，且胃癌组织miR-301a表达水平越高者，肿瘤组织分化程度越差。上调miR-301a表达水平能有效增强胃癌细胞株SGC-7901体外增殖、克隆形成、迁移侵袭及体内成瘤能力，抑制凋亡，下调miR-301a除了逆转上述生物学行为，还诱导细胞周期发生G2/M期阻滞。生物信息学分析提示转录因子RUNX3的mRNA的3'UTR含有miR-301a直接作用的种子序列，双荧光素酶报告系统检测进一步证实了该靶序列，qRT-PCR及Immunoblot证实miR-301a对RUNX3蛋白表达的调控发生在转录后水平。
　　[结论]miR-301a在胃癌细胞和组织中处于高表达状态，其表达水平与肿痛组织分化负相关;上调miR-301a表达水平能增强胃痛细胞的恶性表型，反之亦然;miR-301a通过对其靶基因RUNX3的调控参与了胃痛的发生发展过程。

目录

声明

摘要

英文缩略语表

绪论

第一部分 miR-301a在胃癌组织中的表达及其临床意义

引言

材料与方法

结果

讨论

第二部分 miR-301a对胃癌细胞SGC-7901细胞生物学的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

第三部分 miR-301a靶基因的预测及验证

引言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

附录一：博士期间发表和待发表的学术论文目录

附录二：发表及待发表文章